基于CRISPR-Cas12a体系检测真菌毒素的方法与流程

文档序号:36912648发布日期:2024-02-02 21:41阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于crispr-cas12a体系检测真菌毒素的方法,其特征在于,包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述真菌毒素为霉菌毒素;

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述识别dna和所述单链dna的摩尔比为1:1.25-1.75;

4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,在步骤(2)中,相对于1mol的单链dna,所述辅助dna的添加量为1-1.2mol;

5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述辅助酶能够消化所述单链-辅助dna复合物释放所述激活dna和所述单链dna,优选为exo iii酶。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述反应混合物ii含有所述单链dna时,所述方法还包括:在所述反应混合液ii中,将可能含有的所述单链dna继续重复反应iii。

7.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述crispr-cas12a体系溶液含有crrna、cas12a蛋白、核糖核酸酶抑制剂和缓冲剂;其中,所述crrna的核苷酸序列如seq id no.5所示,所述激活dna的核酸序列如seq id no.4所示。

8.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述活化的条件包括:温度为30-45℃,时间为20-30min。

9.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述电化学生物传感器包括电极和修饰在所述电极上的功能层,所述功能层含有聚丙烯胺盐酸盐、二氧化铈以及二茂铁标记的非特异性单链dna;

10.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:在步骤(4)前,检测电化学生物传感器的初始电化学信号,并计算出所述电化学信号与所述初始电化学信号的差值百分比。


技术总结
本发明涉及电化学分析检测领域,公开了一种基于CRISPR‑Cas12a体系检测真菌毒素的方法,包括:(1)将单链DNA与真菌毒素的识别DNA进行反应I得到单链‑识别DNA复合物,单链DNA为与识别DNA互补的DNA;(2)将单链‑识别DNA复合物和可能含有真菌毒素的待测样品进行反应II后,与含有激活DNA片段的辅助DNA混合进行反应III得到反应混合物I,将反应混合物I与辅助酶混合进行反应IV得到可能含有激活DNA的反应混合物II,辅助DNA为与单链DNA互补的DNA;(3)将反应混合物II与CRISPR‑Cas12a体系溶液混合活化后得到反应液;(4)将反应液滴加至电化学生物传感器进行反应V,待反应V结束后检测电化学生物传感器的电化学信号。该方法具有较高的灵敏度和较高的选择性,操作简单快速。

技术研发人员:吴丽娜,吴成媛,郭玲,吕广萍
受保护的技术使用者:之江实验室
技术研发日:
技术公布日:2024/2/1
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