厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用与流程

本发明涉及药物检测技术，尤其涉及一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用。

背景技术：

1、厚朴麻黄汤出自张仲景所著《金匮要略》：厚朴五两，麻黄四两，石膏如鸡子大，杏仁半升，半夏半升，干姜二两，细辛二两，小麦一升，五味子半升。上九味，以水一斗二升，先煮小麦熟，去滓，内诸药，煮取三升。作为《古代经典名方目录(第一批)》的收载方剂，厚朴麻黄汤疗效确切，多项临床研究证实该方可有效缓解慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病及肺气肿患者的临床症状，降低血清炎性因子水平。现阶段尚无厚朴麻黄汤质量控制的相关研究报道，质量属性不明确，限制了其进一步的制剂开发。

2、特征图谱是建立一种用于分析被测物质中某类或某几类成分的色谱图谱或光谱图谱。目前，特征图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的有效成分，是当前中药界关注的热点问题，近年来，人们已经逐步认识到，只针对某一化学成分而形成的质量控制方法，已经不能恰当的反映产品的内在质量，中药特征图谱作为一种多指标的质量控制模式，能够更好的控制产品内在质量。因此，通过构建厚朴麻黄汤指纹图谱能够有效对厚朴麻黄汤进行质量控制。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用。

2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

3、一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，所述构建方法是取厚朴麻黄汤制备供试品溶液，所得供试品溶液经hplc-q-tof-ms法检测，即得所述厚朴麻黄汤指纹图谱；

4、所述hplc-q-tof-ms中高效液相色谱采用的流动相a为乙腈、流动相b为浓度为0.1～0.3wt％的甲酸水溶液。

5、进一步的，所述高效液相色谱的洗脱方式为梯度洗脱；

6、所述梯度洗脱的洗脱条件为：

7、0～16min，5％流动相a，95％流动相b；

8、16～18min，5％→9％流动相a，95％→91％流动相b；

9、18～28min，9％→10％流动相a，91％→90％流动相b；

10、28～32min，10％流动相a，90％流动相b；

11、32～40min，10％→14％流动相a，90％→86％流动相b；

12、40～52min，14％→16％流动相a，86％→84％流动相b；

13、52～63min，16％→20％流动相a，84％→80％流动相b；

14、63～73min，20％→33％流动相a，80％→67％流动相b；

15、73～80min，33％→70％流动相a，67％→30％流动相b；

16、80～90min，70％流动相a，30％流动相b。

17、进一步的，所述高效液相色谱的检测波长为280nm。

18、进一步的，所述高效液相色谱的柱温为34～36℃、流速为0.8～1.2ml/min。

19、进一步的，所述hplc-q-tof-ms的质谱条件为：

20、干燥器(n2)流速为10.00l/min；温度为320℃；雾化器压力为45psig；毛细管电压为4000v；碎裂器为170v，skimmer65 v，oct 1rf vpp,750v；采集频率皆为3spectra/s；离子模式为正离子模式。

21、进一步的，所述供试品溶液是取100重量份厚朴麻黄汤加水溶解，并定容至10体积份制得；

22、所述重量份与体积份的比例关系为mg：ml。

23、进一步的，所述厚朴麻黄汤指纹图谱共获得并指认18个特征峰。

24、进一步的，18个所述特征峰的相对保留时间及对应的化学成分分别为：

25、1号峰对应的化学成分为苯丙氨酸、保留时间为9.180；

26、2号峰对应的化学成分为去甲基麻黄碱、保留时间为10.170；

27、3号峰对应的化学成分为去甲基伪麻黄碱、保留时间为11.431；

28、4号峰对应的化学成分为麻黄碱、保留时间为14.296；

29、5号峰对应的化学成分为伪麻黄碱、保留时间为15.661；

30、6号峰对应的化学成分为甲基麻黄碱、保留时间为17.093；

31、7号峰对应的化学成分为甲基伪麻黄碱、保留时间为17.503；

32、8号峰对应的化学成分为木兰箭毒碱、保留时间为27.598；

33、9号峰对应的化学成分为苦杏仁苷、保留时间为33.020；

34、10号峰对应的化学成分为木兰碱、保留时间为38.272；

35、11号峰对应的化学成分为瑞枯灵、保留时间为42.092；

36、12号峰对应的化学成分为oblongine、保留时间为43.286；

37、13号峰对应的化学成分为巴婆碱、保留时间为48.913；

38、14号峰对应的化学成分为6-姜烯酚、保留时间为82.204；

39、15号峰对应的化学成分为南五味子木脂素l、保留时间为82.613；

40、16号峰对应的化学成分为五味子醇甲、保留时间为82.647；

41、17号峰对应的化学成分为和厚朴酚、保留时间为84.523；

42、18号峰对应的化学成分为厚朴酚、保留时间为86.604。。

43、一种上述构建方法获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱。

44、一种上述标准指纹图谱在厚朴麻黄汤的研究/开发/生产/临床应用全过程质量评价或控制中的应用。

45、本发明的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用的有益效果为：

46、本发明的构建方法能够将厚朴麻黄汤中主要化学成分在特征图谱中均有所体现，并指认18种化学成分，所建立的标准指纹图谱能够较为全面地反映厚朴麻黄汤的质量信息；

47、本发明通过改变洗脱体系，利用厚朴麻黄汤中不同有效成分理化性质不同的特点，改变检测波长，从而达到将厚朴麻黄汤中不同有效成分很好分离且同时检出的目的；

48、本发明通过调整流动相和选择合适的洗脱梯度，获得了分离度好、基准线较平稳，出峰较多且更能反映厚朴麻黄汤质量的标准指纹图谱；

49、本发明的检测波长显著优于其它检测波长，通过本发明的检测波长能够获得出峰更好的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱；

50、本发明通过选择合适的色谱柱、柱温、流速等工艺条件，有效优化了分离条件，从而提高了厚朴麻黄汤标准指纹图谱的出峰稳定性；

51、本发明通过选用合适的质谱条件，能够一次性对18种化学成分进行指认，降低了化学成分指认难度；

52、本发明的构建方法还具有良好的可行性、稳定性和重现性；

53、本发明所获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱具有18个特征峰，能够为后续厚朴麻黄汤在研究、开发、生产、临床应用全过程中的质量监控提供有效保障；

54、利用本发明所获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱中特征峰的有无及特征，可以全面监控厚朴麻黄汤的产品质量，通过色谱指纹特征相似程度的比较，评价厚朴麻黄汤的优劣、考察稳定性和一致性，弥补了现行质量控制方法的不足，同时还可以监控厚朴麻黄汤生产工艺的稳定性，保证其质量的稳定、均一、可控；

55、本发明所获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱提高了厚朴麻黄汤成品、半成品的质量监控标准，有效防止了产品伪造事件的发生，保证了厚朴麻黄汤的正常生产、流通秩序；在本发明的基础上，还可以开展指纹图谱信息与药效活性信息的相关性研究，从而深入地阐明厚朴麻黄汤的内在化学成分与该制剂疗效的相关性。