一种核酸适配体电化学传感器的制备方法及其应用

文档序号:34248377发布日期:2023-05-25 02:02阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种核酸适配体电化学传感器的制备方法,其特征在于,包含以下操作步骤:

2.根据权利要求1所述核酸适配体电化学传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述合成多孔碳材料(sa-c)为将海藻酸钠在惰性气体保护下升温至700-900℃保持1-2h,冷却,将所得黑色固体分别用hcl溶液和水洗涤,过滤,即得多孔碳材料(sa-c)。

3.根据权利要求2所述核酸适配体电化学传感器的制备方法,其特征在于:海藻酸钠20g在惰性气体保护下,升温程序为5℃/min,升温至800℃保持1.5h,所述hcl溶液的摩尔浓度为5mol/l;所述的惰性气体为氩气。

4.根据权利要求1所述核酸适配体电化学传感器的制备方法,其特征在于:步骤(2)为取步骤(1)的多孔碳材料(sa-c),加入浓h2so4和浓hno3混合液回流1-3h,冷却,将所得固体经水洗,离心,收集产物干燥,即得羧基功能化多孔碳材料(sa-c-cooh)。

5.根据权利要求4所述核酸适配体电化学传感器的制备方法,其特征在于:所述浓h2so4和浓hno3混合液中浓h2so4和浓hno3的体积比为3:1,浓h2so4和浓hno3混合液的体积为100ml,多孔碳材料的质量为0.5g,所述回流时间为2h,回流温度为60℃。

6.根据权利要求1所述核酸适配体电化学传感器的制备方法,其特征在于:步骤(3)中所述的冲洗皆为采用三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液冲洗,所述三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液的摩尔浓度为10mmol/l,ph值为7.4;步骤(3)中所述的干燥皆为红外灯下烤15min;步骤(3)中将步骤(2)中的羧基功能化多孔碳材料(sa-c-cooh)于水中超声分散,制备得到均匀稳定质量浓度为1.0mg/ml的羧基功能化多孔碳(sa-c-cooh)悬浊液,电极的修饰量为6μl;步骤(3)中所述预处理后的玻碳电极为将玻碳电极(gce)用氧化铝抛光成镜面,依次用hno3溶液、乙醇和超纯水超声清洗,自然干燥后即得;步骤(3)中所述预处理后的玻碳电极为将玻碳电极(gce)分别用粒径为0.3μm和0.05μm的氧化铝抛光成镜面;所述hno3溶液中的硝酸(hno3)与水的体积比为1:1;所述的乙醇为无水乙醇;步骤(3)中浸入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)混合液中10-60min活化羧基;所述1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)混合液中,1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)的摩尔浓度均为0.5mol/l;步骤(3)中所述的孵育为30-40℃孵育1.5-3h;步骤(3)中所述封闭的时间为10-60min;步骤(3)中所述核酸适配体溶液的摩尔浓度为6μmol/l;所述孵育为37℃孵育2.5h;所述牛血清蛋白(bsa)溶液的浓度为0.5%,所述封闭的时间为30min。

7.权利要求1-6任一所述的制备方法得到的核酸适配体电化学传感器的应用,其特征在于:所述的应用为用于检测展青霉素。

8.使用权利要求7所述的核酸适配体电化学传感器检测展青霉素的方法,其特征在于,包括以下步骤:

9.根据权利要求7所述核酸适配体电化学传感器检测展青霉素的方法,其特征在于:步骤s2所述的展青霉素标准溶液浓度分别为:0.0ng/l、0.5ng/l、1ng/l、10ng/l、100ng/l、1000ng/l、10000ng/l、100000ng/l、500000ng/l、1000000ng/l、5000000ng/l;步骤s2中的线性方程为y=4.8137x+5.3212,相关系数r2=0.9972;其中y为展青霉素与核酸适配体电化学传感器特异性结合前后的电流差值δi,x为展青霉素浓度的对数。

10.根据权利要求7所述核酸适配体电化学传感器检测展青霉素的方法,其特征在于:步骤s2和步骤s3的特异性结合时间为75min;步骤s2和步骤s3中含[fe(cn)6]3-/4-和kcl的混合溶液中的[fe(cn)6]3-/4-摩尔浓度为5mmol/l,kcl的摩尔浓度为0.1mol/l。


技术总结
本发明公开了一种核酸适配体电化学传感器的制备方法,包含以下操作步骤:(1)合成多孔碳材料(SA‑C);(2)取步骤(1)的多孔碳材料(SA‑C)在浓酸下回流制备羧基功能化多孔碳材料(SA‑C‑COOH);(3)核酸适配体电化学传感器的构建。本发明的核酸适配体电化学传感器跟展青霉素特异性结合前后的电流差值与展青霉素浓度的对数在0.5‑5000000ng/L范围内呈良好线性关系,检测灵敏度高,选择性好,检测结果准确。

技术研发人员:蒋翠文,牙禹,谢丽萍,闫飞燕,唐莉,王彦力,梁静,梁钟丹,宁德娇,罗丽红,李焘,韦宇宁,廖洁
受保护的技术使用者:广西壮族自治区农业科学院
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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