一种适用于远航环境的通用型食源性致病菌检测方法

文档序号:34904653发布日期:2023-07-27 12:51阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种适用于远航环境的通用型食源性致病菌检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的食源性致病菌为鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。

3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(a)中识别探针的制备方法为:取1ml的uio-66材料与3ml 10mm亚甲基蓝溶液混合,放于26℃、160rpm的摇床中振荡过夜,离心5min,弃上清,用1ml超纯水重悬底部析出的沉淀,放于室温备用;将适配体于95℃水浴加热10min,之后立即冰浴10min,使用磷酸盐缓冲溶液将目标细菌适配体稀释至2μm,以1:1的体积与上述溶液混合,将混合溶液放于37℃、160rpm的摇床中振荡过夜;用磷酸盐缓冲溶液冲洗去除未结合的适配体后,得到uio-66/mb/aptamer识别探针。

4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(b)中所述的滤膜孔径为0.45μm。

5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(b)中取识别探针溶液,以1:1的体积与被测菌液混合,于37℃、160rpm的摇床中振荡30min,取出后使用1ml针筒抽取300μl所得溶液,并在针筒前端套上0.45μm孔径的滤网,推动针筒塞进行缓慢过滤,可得到约200μl的澄清蓝色溶液;取100μl该溶液均匀滴涂于丝网印刷电极表面后进行电化学检测。

6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(c)中用差分脉冲伏安法测试检测液在-0.6v~0v范围内的还原电流信号,根据所测得的还原电流值与对应的菌液浓度值绘制线性关系,得出线性方程。

7.一种通用型食源性致病菌识别探针,其特征在于,是将负载亚甲基蓝的uio-66作为信号放大探针,细菌适配体通过与uio-66的连接构成识别探针。

8.根据权利要求7所述的识别探针,其特征在于,所述的识别探针的制备方法为:取1ml的uio-66材料与3ml 10mm亚甲基蓝溶液混合,放于26℃、160rpm的摇床中振荡过夜,离心5min,弃上清,用1ml超纯水重悬底部析出的沉淀,放于室温备用;将适配体于95℃水浴加热10min,之后立即冰浴10min,使用磷酸盐缓冲溶液将目标细菌适配体稀释至2μm,以1:1的体积与上述溶液混合,将混合溶液放于37℃、160rpm的摇床中振荡过夜;用磷酸盐缓冲溶液冲洗去除未结合的适配体后,得到uio-66/mb/aptamer识别探针。

9.一种如权利要求7或8所述的识别探针在远航环境的通用型食源性致病菌检测中的应用。


技术总结
本发明涉及检测技术领域,具体是一种适用于远航环境的通用型食源性致病菌检测方法,首先采用UiO‑66富集亚甲基蓝,并与目标细菌适配体进行结合,得到的UiO‑66/MB/Aptamer同时作为信号放大和识别探针,再采用膜分离的方法滤出未与细菌结合的探针,使用差分脉冲伏安法检测亚甲基蓝的电化学信号,构建对应线性关系,以此定量检测细菌的浓度。本发明不仅保证了检测食源性致病菌的灵敏度、检测时间、便携性等特点,还提供了一个用于检测多种目标细菌的通用型检测方法,通过高温、高湿、高盐环境下的重现性和稳定性测试,证明本发明可以在实现在复杂远航环境中对食源性致病菌进行快速、灵敏且稳定的检测。

技术研发人员:莫烽锋,代鸽,沈慧,姚瀚东
受保护的技术使用者:中国人民解放军海军军医大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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