一种包含当归的中药组合物中的质量控制方法及其应用与流程

本发明涉及医药，具体涉及一种包含当归的中药组合物的质量控制方法及其应用。

背景技术：

1、根据《中华人民共和国中医药法》，古代经典名方是指“至今仍广泛应用、疗效确切、具有明显特色与优势的古代中医典籍所记载的方剂”。古代经典名方在我国有着历史悠久、丰富的人用历史并应用至今，是历代医家临床实践精华的总结，承载着数千年来中医药灿烂文明的深厚积淀，是中医药理论经过几千年的锤炼，是历代临床经验的总结，是中医药伟大宝库中最精华的部分。对中药经典名方进行深入的研究与开发，是挖掘传统中医药宝库的一把金钥匙。尤其在抗击新型冠状病毒过程中，中医药在经典名方的基础上筛选出有效方剂“三药三方”，如三方其中的清肺排毒汤是来自张仲景《伤寒杂病论》的经典名方组合，在治疗新冠患者以及预防上发挥了巨大的作用，凸显了中医药的优势。

2、中药经典名方汤剂作为传统的中医临床用药的最常用的剂型，具有组方合理、起效迅速、疗效显著、易于吸收等优点，深受广大患者的信赖。却因调配、携带、临时煎煮、久置容易发生霉败变质、汤液味苦和量大，以及标准难以统一，严重影响其临床疗效等缺点，不能适应现代人的生活要求。为了保持汤剂的优势，克服汤剂的种种不足，国家药品监督管理局药品审评中心于2021年08月31日发布的《按古代经典名方目录管理的中药复方制剂药学研究技术指导原则(试行)》中明确指出按古代经典名方目录管理的中药复方制剂的质量应与经典名方基准样品的质量基本一致。基准样品代表了制剂的整体内在质量，除了成型工艺外，基准样品与制剂的其余质量控制指标均基本一致。因此基准样品是制剂内在质量的实物对照，是大生产工艺优化及其质量标准制定的参照物。基准样品是经典名方乃至所有中药研发的基准，是保证药物的安全性和有效性的对照物。经典名方复方制剂生产工艺路线制定、参数的优化和质量标准制定要以经典名方基准样品为参照。基准样品是沟通临床-企业-科研的纽带，是传承、应用和发扬传统中医药的基准。

3、指纹图谱是基于中药物质群整体作用的认识，借助于波谱和色谱技术获得中药化学成分的光谱或色谱图，是实现鉴别中药真实性、评价质量一致性和产品稳定性的可行模式，具有信息量大、特征性强、整体性和模糊性等特点。中药指纹图谱能较全面地反映药材所含化学成分的相对关系，体现了中药成分的复杂性和相关性，与中医药的传统理论相适应，能真正对中药内在质量进行有效表征、综合评价和全面控制，尤其适用于有效成分不完全明确或不需要完全明确的情况下，对中药材及中药产品进行质量控制。中药指纹图谱除能用于考察中药材产地、采收季节、采收部位、炮制加工、储存时间等因素，以提供依据鉴别生产前原料药材的真伪优劣，更可用于中药生产过程的质量控制：追踪制剂中某些化学成分的变化，监测原料药材与成品之间、成品的各批次间质量的一致性及稳定性。与指标成分含量测定的质量分析方法相比，指纹图谱能够比较全面地反映中药化学成分的种类和数量，在中药复方制剂有效成分尚未完全阐明的现状下，可实现对中药内在质量的综合评价和对其整体物质的有效控制，是目前中药及其制剂质量控制的有效手段之一。

4、目前，尚未见文献报道对本发明所要求保护的包含当归的中药组合物的化学成分进行全面地分析以及指纹图谱研究，现有技术中，仅对该中药复方中的单一成分进行质量分析，尚无较全面、系统的质量控制方法反映本发明的中药复方及成品中主要基准样品成分的质量状况，无法对其生产过程及产品质量有效控制，不能较好地保证其临床疗效，故需采用能全面控制本发明的中药复方整体质量的指纹图谱的质控方法控制其关键质量。

技术实现思路

1、基于此，本发明提供了一种包含当归的中药组合物的含量测定方法，该测定方法包括如下步骤：

2、(1)取第一中药组合物供试品溶液、第一对照品溶液进行第一次检测，该第一次检测的色谱条件为：采用填料为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相a选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相b为酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，梯度洗脱程序为：0～12min，79％b；12～13min，78％b→57％b；13～37min，57％b→55％；37～38min，55％b→10％b；38～40min，10％b；40～41min，10％b→79％b；41～55min，79％b，流速为0.4～1.5ml/min，柱温为20～40℃，检测波长为150～350nm，进样量为5～20μl；根据第一次检测结果，获得该第一中药组合物供试品溶液中该第一对照品的含量信息；

3、(2)取第二中药组合物供试品溶液、第二对照品溶液进行第二次检测，该第二次检测的色谱条件为：采用填料为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相a选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相b为酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，梯度洗脱程序为：0～38min，74％b→73％b；38～39min，73％b→10％b；39～41min，10％b；41～42min，10％b→74％b；42～55min，74％b；，流速为0.1～1.5ml/min，柱温为30～50℃，检测波长为200～400nm，进样量为5～20μl；根据第二次检测结果，获得该第二中药组合物供试品溶液中该第二对照品的含量信息；

4、其中，该中药组合物包括当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪，该第一对照品为盐酸黄柏碱和黄芩苷，该第二对照品为阿魏酸。

5、在本发明中，流速、波长、温度、速率、时间、浓度、进样量、当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“30～50”时，所描述的范围应被解释为包括范围“30～50”、“30～45”、“30～40”、“30～35”、“35～50”、“35～45”、“35～40”、“40～50”、“40～45”、“45～50”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

6、进一步地，在步骤(1)中，该信息为根据所记录的该第一中药组合物供试品溶液的色谱图和该第一对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，按照外标法计算该第一中药组合物供试品溶液中该第一对照品的含量。进一步地，该盐酸黄柏碱的标准曲线为y＝88552x－9415，r2＝0.9998。进一步地，该黄芩苷的标准曲线为y＝36862x－97119，r2＝0.9998。进一步地，该第一中药组合物供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药组合物粉末，添加醇进行提取之后，放冷、补重、摇匀、过滤，取续滤液，得到该第一中药组合物供试品溶液。进一步地，该中药组合物粉末的质量为0.1～10g，例如约0.3g。进一步地，该中药组合物粉末与该醇的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～10):(10～60)，例如约0.3:约50。进一步地，该醇为甲醇。进一步地，该甲醇的质量体积百分比为10％～100％，例如约50％。进一步地，该提取为回流提取、冷浸提取、振摇提取和/或超声提取，例如回流提取，例如加热回流提取。进一步地，该加热回流提取的时间为10～60min，例如约30min。进一步地，该盐酸黄柏碱对照品溶液的制备方法包括：称取适量的盐酸黄柏碱，添加质量体积百分比为10％～100％例如约40％的甲醇配制成盐酸黄柏碱浓度为0.001～10mg/ml例如约0.01mg/ml的该盐酸黄柏碱对照品溶液。进一步地，该黄芩苷对照品溶液的制备方法包括：称取适量的黄芩苷，添加质量体积百分比为10％～100％例如约70％的甲醇配制成黄芩苷浓度为0.01～100mg/ml例如约0.15mg/ml的该黄芩苷对照品溶液。进一步地，该高效液相检测的该流速为0.6～1.2ml/min，例如约1.0ml/min。进一步地，该柱温为25～35℃，例如约30℃。进一步地，该检测波长为180～240nm，例如210nm。进一步地，该进样量为8～12μl，例如约10μl。进一步地，该盐酸黄柏碱对应的色谱峰的理论塔板数不低于4000。进一步地，该盐酸黄柏碱对应的色谱峰的分离度大于2.0。进一步地，该色谱柱选自以下的一种：kromasil100-5-c18柱、kinetex 5umc18柱、hypersil_gold柱、agilent 5tc-c18柱和halo aq-c18柱。进一步地，该色谱柱的规格：柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。

7、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约0.3”包括0.3的±5％，或从0.285到0.315；“约50”包括50的±5％，或从47.5到52.5；“约30”包括30的±5％，或从28.5到31.5；“约40”包括40的±5％，或从38到42；“约0.01”包括0.01的±5％，或从0.0095到0.0105；“约70”包括70的±5％，或从66.5到73.5；“约0.15”包括0.15的±5％，或从0.1425到0.1575；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约30”包括30的±5％，或从28.5到31.5；“约10”包括10的±5％，或从9.5到10.5。

8、进一步地，在步骤(2)中，该信息为根据所记录的该第二中药组合物供试品溶液的色谱图和该第二对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，按照外标法计算该第二中药组合物供试品溶液中该第二对照品的含量。进一步地，该阿魏酸的标准曲线为y＝79017x+7596，r2＝0.9999。进一步地，该第二中药组合物供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药组合物粉末，添加水进行超声处理之后，用第一溶剂进行提取，得到第一溶液；将该第一溶液进行蒸干，得到残渣，将该残渣用第二溶剂进行溶解，定容，摇匀，得到该第二中药组合物供试品溶液。进一步地，该中药组合物粉末的质量为1～10g，例如约2g。进一步地，该中药组合物粉末与该水的质量/体积(g/ml)之比为(1～10):(10～70)，例如约2:约60。进一步地，该中药组合物粉末与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(1～10):(10～30)，例如约2:约20。进一步地，该中药组合物粉末与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(1～10):(5～20)，例如约2:约10。进一步地，该超声处理的功率为300～700w，例如约500w。进一步地，该超声处理的频率为20～60khz，例如约40khz。进一步地，该超声处理的时间为5～20min，例如约10min。进一步地，该第一溶剂为有机溶剂，例如乙酸乙酯。进一步地，该提取为回流提取、冷浸提取、振摇提取和/或超声提取，例如振摇提取。进一步地，该振摇提取的次数为2～7次，例如4次。进一步地，该第二溶剂为醇，例如甲醇。进一步地，该甲醇的质量体积百分比为10％～100％，例如约70％。进一步地，该阿魏酸对照品溶液的制备方法包括：称取适量的阿魏酸，添加质量体积百分比为10％～100％的甲醇例如约70％的甲醇配制成阿魏酸浓度为0.01～100mg/ml例如约0.05mg/ml的该阿魏酸对照品溶液。进一步地，该高效液相检测的该流速为0.5～1.0ml/min，例如约0.7ml/min。进一步地，该柱温为35～45℃，例如约40℃。进一步地，该检测波长为300～350nm，例如323nm。进一步地，该进样量为8～12μl，例如约10μl。进一步地，该阿魏酸对应的色谱峰的理论塔板数不低于5000。进一步地，该阿魏酸对应的色谱峰的分离度大于2.0。进一步地，该色谱柱选自以下的一种：kromasil 100-5-c18柱、kinetex 5um c18柱、hypersil_gold柱、agilent 5tc-c18柱和halo aq-c18柱。进一步地，该色谱柱的规格：柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。

9、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约2”包括2的±5％，或从1.9到2.1；“约60”包括60的±5％，或从57到63；“约20”包括20的±5％，或从19到21；“约10”包括10的±5％，或从9.5到10.5；“约500”包括500的±5％，或从475到525；“约40”包括40的±5％，或从38到42；“约10”包括10的±5％，或从9.5到10.5；“约70”包括70的±5％，或从66.5到73.5；“约0.05”包括0.05的±5％，或从0.0475到0.0525；“约0.7”包括0.7的±5％，或从0.665到0.735。

10、进一步地，该流动相a为甲醇。进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的弱酸及其盐、弱碱及其盐中的一种或多种。进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的甲酸、冰乙酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸和甲酸铵、乙酸和乙酸钠、乙酸和乙酸铵、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和柠檬酸、柠檬酸和柠檬酸钠、甘氨酸和盐酸、或者邻苯二甲酸和盐酸。进一步地，该酸水溶液为0.01％～1％的酸水溶液。进一步地，该酸水溶液为0.01％～1％的磷酸水溶液。进一步地，该酸水溶液为约0.1％的磷酸水溶液。进一步地，该缓冲盐水溶液为磷酸盐水溶液和/或醋酸盐水溶液。进一步地，该缓冲盐水溶液的ph值不大于7.0。

11、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约0.1”包括0.1的±5％，或从0.095到0.105。

12、进一步地，该中药组合物粉末的制备方法包括：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪，破碎至粗颗粒，加水浸泡，武火煎煮至沸，文火煎煮一段时间，得到煎煮液；以及将该煎煮液趁热过滤取滤液，减压浓缩至在15～25℃下相对密度为1.05～1.10的浸膏，预冻或速冻之后将该浸膏在冷冻干燥机中干燥，粉碎，过筛，混匀，得到该中药组合物粉末。进一步地，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～20)。进一步地，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约15.48。进一步地，该粗颗粒的直径为3～6mm，例如4～5mm。进一步地，该水与该包含当归的中药组合物的体积/质量之比为25～35，例如约29。进一步地，该浸泡的时间为10～100min，例如约60min。进一步地，该武火煎煮时加盖。进一步地，该文火煎煮时不加盖。进一步地，该文火煎煮的时间为10～100min，例如约50min。进一步地，该趁热过滤的温度为80～85℃。进一步地，该过滤为120目尼龙滤布单层过滤。进一步地，该滤液与该水的体积之比值为0.2～1，例如约0.5。进一步地，在该预冻或速冻之前，将该浸膏置于不锈钢盘中，使其铺料厚度为9～11mm。进一步地，该预冻为在≦-18℃冰柜中将该浸膏预冻过夜。进一步地，该速冻为使用液氮将该浸膏速冻至内无湿心。进一步地，该减压浓缩的温度不高于60℃。进一步地，该减压浓缩的真空度为-0.085～-0.099mpa。进一步地，该冷冻干燥的冷阱温度不高于-40℃。进一步地，该冷冻干燥的真空度不高于100pa。进一步地，该冷冻干燥至水分不高于8％。进一步地，该筛为三号筛。

13、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约7.74”包括7.74的±5％，或从7.353到8.127；“约15.48”包括15.48的±5％，或从14.706到16.254；“约29”包括29的±5％，或从27.55到30.45；“约60”包括60的±5％，或从57到63；“约50”包括50的±5％，或从47.5到52.5；“约0.5”包括0.5的±5％，或从0.475到0.525。

14、根据本发明的另一个方面，提供了一种包含当归的中药组合物的指纹图谱构建方法，该构建方法包括如下步骤：中药组合物供试品溶液的制备：称取适量的中药组合物粉末，加水溶解，超声处理之后，放冷、定容，摇匀，得到该中药组合物供试品溶液，其中，该中药组合物包括当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪；对照品溶液的制备：称取适量的盐酸巴马汀、盐酸药根碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱、汉黄芩苷、阿魏酸和黄芩苷，添加甲醇配制成浓度分别为0.01～100mg/ml的该对照品溶液；根据高效液相检测该中药组合物供试品溶液和该对照品溶液的结果，获得中药组合物指纹图谱；该高效液相检测的色谱条件为：采用填料为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相a选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相b为酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，梯度洗脱程序为：0～8min，95％b→91％b；8～17min，91％b→81％b；17～33min，81％b；33～35min，81％b→73％b；35～49min，73％b→71％b；49～56min，71％b；56～74min，71％b→67％b；74～81min，67％b→52％b；81～95min，52％b→47％b；95～100min，47％b→10％b，流速为0.4～1.5ml/min，柱温为20～40℃，检测波长为200～400nm，进样量为5～20μl。

15、进一步地，该中药组合物供试品溶液的制备中，该超声提取的功率为300～700w，例如约500w。进一步地，该超声提取的频率为20～60khz，例如约40khz。进一步地，该超声提取的时间为5～20min，例如约10min。进一步地，该对照品溶液中盐酸巴马汀的浓度为约0.06mg/ml。进一步地，该对照品溶液中盐酸药根碱的浓度为约0.06mg/ml。进一步地，该对照品溶液中表小檗碱的浓度为约0.075mg/ml。进一步地，该对照品溶液中盐酸黄连碱的浓度为约0.075mg/ml。进一步地，该对照品溶液中盐酸小檗碱的浓度为约0.075mg/ml。进一步地，该对照品溶液中盐酸黄柏碱的浓度为约0.075mg/ml。进一步地，该对照品溶液中汉黄芩苷的浓度为约0.1mg/ml。进一步地，该对照品溶液中阿魏酸的浓度为约0.1mg/ml。进一步地，该对照品溶液中黄芩苷的浓度为约0.15mg/ml。进一步地，该高效液相检测的该流速为0.6～1.2ml/min，例如约1.0ml/min。进一步地，该柱温为25～35℃，例如约30℃。进一步地，该检测波长为200～250nm，例如225nm。进一步地，该进样量为8～16μl，例如约10μl。进一步地，该盐酸黄柏碱对应的色谱峰的理论塔板数不低于5000。

16、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约500”包括500的±5％，或从475到525；“约40”包括40的±5％，或从38到42；“约10”包括10的±5％，或从9.5到10.5；“约0.06”包括0.06的±5％，或从0.057到0.063；“约0.075”包括0.075的±5％，或从0.07125到0.07875；“约0.1”包括0.1的±5％，或从0.095到0.105；“约0.15”包括0.15的±5％，或从0.1425到0.1575；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约30”包括30的±5％，或从28.5到31.5；“约10”包括10的±5％，或从9.5到10.5。

17、进一步地，在该检测波长为225nm时，该指纹图谱包括1-15号峰，其中，15号峰为汉黄芩苷作为参照峰，1-15号峰的保留时间平均值分别对应为约15.96min、约26.90min、约28.07min、约32.19min、约43.44min、约44.37min、约58.67min、约63.35min、约69.90min、约75.17min、约77.14min、约80.11min、约86.74min、约90.48min和约94.44min。进一步地，在该检测波长为225nm时，该指纹图谱包括1-15号峰，其中，15号峰为汉黄芩苷作为参照峰，1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰、11号峰、12号峰、13号峰和14号峰的相对保留时间平均值分别对应为约0.17、约0.28、约0.30、约0.34、约0.46、约0.47、约0.62、约0.67、约0.74、约0.80、约0.82、约0.85、约0.92、和约0.96。

18、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约15.96”包括15.96的±5％，或从15.162到16.758；“约26.90”包括26.90的±5％，或从25.555到28.245；“约28.07”包括28.07的±5％，或从26.6665到29.4735；“约32.19”包括32.19的±5％，或从30.5805到33.7995；“约43.44”包括43.44的±5％，或从41.268到45.612；“约44.37”包括44.37的±5％，或从42.1515到46.5885；“约58.67”包括58.67的±5％，或从55.7365到61.6035；“约63.35”包括63.35的±5％，或从60.1825到66.5175；“约69.90”包括69.90的±5％，或从66.405到73.395；“约75.17”包括75.17的±5％，或从71.4115到78.9285；“约77.14”包括77.14的±5％，或从73.283到80.997；“约80.11”包括80.11的±5％，或从76.1045到84.1155；“约86.74”包括86.74的±5％，或从82.403到91.077；“约90.48”包括90.48的±5％，或从85.956到95.004；“约94.44”包括94.44的±5％，或从89.718到99.162；“约0.17”包括0.17的±5％，或从0.1615到0.1785；“约0.28”包括0.28的±5％，或从0.266到0.294；“约0.30”包括0.30的±5％，或从0.285到0.315；“约0.34”包括0.34的±5％，或从0.323到0.357；“约0.46”包括0.46的±5％，或从0.437到0.483；“约0.47”包括0.47的±5％，或从0.4465到0.4935；“约0.62”包括0.62的±5％，或从0.589到0.651；“约0.67”包括0.67的±5％，或从0.6365到0.7035；“约0.74”包括0.74的±5％，或从0.703到0.777；“约0.80”包括0.80的±5％，或从0.76到0.84；“约0.82”包括0.82的±5％，或从0.779到0.861；“约0.85”包括0.85的±5％，或从0.8075到0.8925；“约0.92”包括0.92的±5％，或从0.874到0.966；“约0.96”包括0.96的±5％，或从0.912到1.008；“约1.00”包括1.00的±5％，或从0.95到1.05。

19、进一步地，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～20)。进一步地，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约15.48。进一步地，该中药组合物粉末的制备方法包括：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪，破碎至粗颗粒，加水浸泡，武火煎煮至沸，文火煎煮一段时间，得到煎煮液；以及将该煎煮液趁热过滤取滤液，减压浓缩至在15～25℃下相对密度为1.05～1.10的浸膏，预冻或速冻之后将该浸膏在冷冻干燥机中干燥，粉碎，过筛，混匀，得到该中药组合物粉末。进一步地，该粗颗粒的直径为3～6mm，例如4～5mm。进一步地，该水与该包含当归的中药组合物的体积/质量之比为25～35，例如约29。进一步地，该浸泡的时间为10～100min，例如约60min。进一步地，该武火煎煮时加盖。进一步地，该文火煎煮时不加盖。进一步地，该文火煎煮的时间为10～100min，例如约50min。进一步地，该趁热过滤的温度为80～85℃。进一步地，该过滤为120目尼龙滤布单层过滤。进一步地，该滤液与该水的体积之比值为0.2～1，例如约0.5。进一步地，在该预冻或速冻之前，将该浸膏置于不锈钢盘中，使其铺料厚度为9～11mm。进一步地，该预冻为在≦-18℃冰柜中将该浸膏预冻过夜。进一步地，该速冻为使用液氮将该浸膏速冻至内无湿心。进一步地，该减压浓缩的温度不高于60℃。进一步地，该减压浓缩的真空度为-0.085～-0.099mpa。进一步地，该冷冻干燥的冷阱温度不高于-40℃。进一步地，该冷冻干燥的真空度不高于100pa。进一步地，该冷冻干燥至水分不高于8％。进一步地，该筛为三号筛。

20、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约7.74”包括7.74的±5％，或从7.353到8.127；“约15.48”包括15.48的±5％，或从14.706到16.254；“约29”包括29的±5％，或从27.55到30.45；“约60”包括60的±5％，或从57到63；“约50”包括50的±5％，或从47.5到52.5；“约0.5”包括0.5的±5％，或从0.475到0.525。

21、进一步地，该流动相a为甲醇。进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的弱酸及其盐、弱碱及其盐中的一种或多种。进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的甲酸、冰乙酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸和甲酸铵、乙酸和乙酸钠、乙酸和乙酸铵、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和柠檬酸、柠檬酸和柠檬酸钠、甘氨酸和盐酸、或者邻苯二甲酸和盐酸。进一步地，该酸水溶液为0.01％～1％的酸水溶液。进一步地，该酸水溶液为0.01％～1％的磷酸水溶液。进一步地，该酸水溶液为约0.5％的磷酸水溶液。进一步地，该缓冲盐水溶液为磷酸盐水溶液和/或醋酸盐水溶液。进一步地，该缓冲盐水溶液的ph值不大于7.0。进一步地，该色谱柱为agilent zorbax sb-c18色谱柱或kromasil 100-5-c18色谱柱。进一步地，该色谱柱的规格：柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。

22、在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约0.5”包括0.5的±5％，或从0.475到0.525。

23、进一步地，在该检测波长为225nm时，2号峰为盐酸黄柏碱，4号峰为木兰花碱，7号峰为盐酸黄连碱，8号峰为表小檗碱，9号峰为盐酸药根碱，11号峰为盐酸小檗碱，12号峰为盐酸巴马汀，13号峰为黄芩苷，15号峰为汉黄芩苷。

24、特别优选地，在该检测波长为225nm时，1号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，2号峰来自黄柏药材，3号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，4号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，5号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，6号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，7号峰来自黄连药材，8号峰来自黄连药材，9号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，10号峰来自黄芩药材，11号峰为黄柏药材、黄连药材的共有峰，12号峰来自黄连药材，13号峰来自黄芩药材，14号峰为该中药组合物在煎煮过程中产生的物质，15号峰来自黄芩药材。

25、根据本发明的另一个方面，提供了一种包含当归的中药组合物的质量控制方法，其特征在于，该质量控制方法包括如下步骤：(1)根据上述指纹图谱构建方法建立中药组合物基准样品标准指纹图谱；(2)取中药组合物供试品溶液，根据上述指纹图谱构建方法中的色谱条件进行检测，得到中药组合物待测样品指纹图谱；以及(3)将步骤(2)所得到的该中药组合物待测样品指纹图谱与步骤(1)所得到的该中药组合物基准样品标准指纹图谱进行对比，符合要求的则为合格产品，不符合要求的则为不合格产品。

26、进一步地，该符合要求包括以下的一种或多种：(1)该中药组合物待测样品指纹图谱中呈现出15个特征色谱峰，各特征色谱峰的保留时间在该中药组合物基准样品标准指纹图谱中相应的对照品色谱峰的保留时间值的±10％之内；(2)以15号峰汉黄芩苷峰为s峰，中药组合物待测样品指纹图谱中的各特征色谱峰与s峰的相对保留时间在该中药组合物基准样品标准指纹图谱的各特征色谱峰的相对保留时间值的±10％之内；以及(3)按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，该中药组合物待测样品指纹图谱与该中药组合物基准样品标准指纹图谱经相似度计算，相似度不得低于0.90。

27、根据本发明的另一个方面，提供了一种根据上述测定方法或上述构建方法或上述质量控制方法在包含当归的中药组合物的质量检测和/或质量评价和/或质量控制中的用途。

28、本发明的有益效果：

29、简而言之，本发明提供了一种包含当归的中药复方基准样品的指纹图谱测定和质量控制方法，该方法确认了15个共有特征峰，条件简单，分析时间短，解决了指纹特征峰难以分开和杂质峰的干扰问题，保证了基准样品的化学组成稳定性和使用安全性，为后续制剂的质量控制提供了重要的参考依据，确保产品的质量稳定，保障中药复方的疗效，让该中药复方更好地为人类生命健康服务。

30、具体而言，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

31、(1)建立本发明中药复方基准样品的指纹图谱，克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷，可以从整体上、宏观上控制本发明中药复方基准样品的内在质量，保证了药物的疗效，利用现代药物研究的主要手段，实现精品传承经典，使经典名方得到了更为正规的质量控制。

32、(2)本发明中药复方基准样品中化学成分复杂，要实现其特征峰的分离难度大，本发明在建立起指纹图谱的过程中，采用了梯度洗脱的方法，解决了指纹特征峰难以分开和杂质峰的干扰问题。

33、(3)本发明在建立本发明中药复方基准样品的指纹图谱过程中，确认了15个共有特征峰，并对其相对保留时间和相对峰面积和相似度进行了研究，保证了基准样品的化学组成稳定性和使用安全性，为后续真武汤复方制剂的质量控制提供重要的参考依据和质量参照。

34、(4)以本发明中药复方基准样品中各有效成分指纹图谱作为一个整体看待，注重各个特征峰的前后顺序和相互关系，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定本发明中药复方基准样品整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性，为完整、准确评价本发明中药复方基准样品的质量提供了新的方法和手段。

35、(5)本发明方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。