一种四逆散加减颗粒的质量控制方法

本发明涉及中药质量控制，尤其是涉及一种四逆散加减颗粒的质量控制方法。

背景技术：

1、四逆散加减颗粒是由柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等组成的中药制剂，方中酸枣仁养心补肝，宁心安神；蒲公英清肝经火热，丹参清心凉血，除烦安神；白术健脾益气，顾护中焦脾胃，诸药共奏疏肝解郁，清肝降火之功效。临床疗效也进一步显示该颗粒具有改善失眠，抗抑郁及抗焦虑的作用。

2、文献“四逆散颗粒质量标准的研究”中，采用薄层色谱法对四逆散颗粒制剂中柴胡、白芍、枳实、甘草进行了定性鉴别。针对柴胡，取四逆散颗粒1.5g，加20ml甲醇，超声振荡提取30min滤过，滤液蒸干，残渣加水适量溶解，用乙醚10ml萃取3次，弃去乙醚层，再用水饱和正丁醇15ml萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压蒸干，以少量甲醇溶解残渣，过中性氧化铝柱(1.2cm×4cm)，以甲醇50ml洗脱，收集甲醇洗脱液，回收甲醇，残渣以甲醇1ml溶解，得供试液。针对白芍、枳实、甘草，取四逆散颗粒1.5g，加20ml甲醇，超声振荡提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。然后分别准备四种成分的对照品溶液和阴性对照液，利用薄层色谱进行分析。

3、另外，文献“四逆散质量标准研究”中，也采用薄层色谱法对柴胡、枳壳、白芍、甘草进行了鉴别。针对柴胡，取本品10g，加乙醚40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇40ml，置80℃水浴回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至5ml，滤过，滤液作为供试品溶液。针对白芍、枳实、甘草，取本品10g，加乙醚40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去滤液残渣加甲醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣如甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。然后分别准备四种成分的对照品溶液和阴性对照液，利用薄层色谱进行分析。

4、不过，以上研究针对的是四逆散颗粒，由四种成分组成，而四逆散加减颗粒成分更多、更复杂，现有的针对单种成分或部分成分的薄层色谱分析方法均无法准确排除干扰，不适用于更为复杂的复方鉴别。目前尚缺乏针对四逆散加减颗粒的有效的质量控制方法。

5、有鉴于此，为了对四逆散加减颗粒实现有效的质量监控，本发明建立了质量评价方法，操作简单，高效，无干扰。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种四逆散加减颗粒的质量控制方法，针对柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等成分组成的四逆散加减颗粒剂，从诸多有效药物成分中分离提取待测定成分，在保证鉴定效果的基础上，实现2种样品即可同时鉴别多种中药成分，并具有高稳定性和重复性，简化质量检测、环保、提高检测效率。

2、为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：

3、本发明提供一种四逆散加减颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：

4、（1）丹参、枳实的特征鉴别：将供试品溶液a、丹参对照药材溶液或丹酚酸b对照品溶液、枳实对照药材溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，使用展开剂1展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视；

5、（2）蒲公英的特征鉴别：将供试品溶液a、蒲公英对照药材溶液或菊苣酸对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，使用展开剂2展开，取出，晾干，氨气熏后喷以三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视；

6、（3）白术的特征鉴别：将供试品溶液a、白术对照药材溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，使用展开剂3展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；

7、（4）酸枣仁的特征鉴别：将供试品溶液c、酸枣仁对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，使用展开剂4展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视；

8、（5）柴胡的特征鉴别：将供试品溶液c、柴胡对照药材溶液或柴胡皂苷对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，使用展开剂5展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；

9、（6）白芍的特征鉴别：吸取供试品溶液c、芍药苷对照品溶液或芍药对照药材溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，使用展开剂1展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视，

10、其中，

11、所述供试品溶液a按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，加稀盐酸，振摇，加入乙酸乙酯振摇，离心，上清液作为供试品溶液a；

12、所述供试品溶液c按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，加水溶解，用水饱和正丁醇提取，用氨试液洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液c；

13、所述展开剂1为体积比5-7:1-3:7-9:2-4:0.5-1.5的二氯甲烷- 甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液；

14、展开剂2为体积比1-3:7-9:1-3:0.5-1.5的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水混合液；

15、展开剂3为体积比6-8:2-4的环己烷-乙酸乙酯混合液；

16、展开剂4为水饱和正丁醇；

17、展开剂5为体积比5-7:25-30:8-10:2-4的二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水混合液。

18、优选地，所述供试品溶液a按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，称取1.5g置于离心管中，加1%盐酸3ml，振摇至无团块，加入乙酸乙酯2ml振摇均匀，离心，上清液作为供试品溶液a。

19、优选地，所述供试品溶液c按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，称取4g，加水20ml溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液c。

20、优选地，

21、所述展开剂1为体积比6:2:8:3:1的二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液；

22、所述展开剂2为体积比2:8:2:1的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水混合液；

23、所述展开剂3为体积比7:3的环己烷-乙酸乙酯混合液；

24、所述展开剂4为水饱和正丁醇；

25、所述展开剂5为体积比6:28:9:3的二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水混合液。

26、优选地，步骤（1）、步骤（4）和步骤（6）中，所述香草醛硫酸溶液的浓度为5%，所述加热的温度为105℃。

27、优选地，步骤（1）中，所述丹参对照药材溶液的制备方法为：丹参对照药材加甲醇，超声处理，滤过，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为丹参对照药材溶液。

28、进一步优选为：取丹参对照药材0.5g，加甲醇12 ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为丹参对照药材溶液。

29、优选地，步骤（1）中，所述枳实阴性供试品溶液的制备方法为：枳实对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液作为枳实对照药材溶液。

30、进一步优选为：取枳实对照药材0.1g，加甲醇30 ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为枳实对照药材溶液。

31、优选地，步骤（1）中，所述丹酚酸b对照品溶液的制备方法为：取丹酚酸b对照品，加甲醇制成每1ml含1.5 mg的溶液，作为丹酚酸b对照品溶液。

32、优选地，步骤（1）中，所述供试品溶液a点样量为2-6μl；丹酚酸b对照品溶液点样量为4-6μl；丹参对照药材溶液点样量为4-6μl；枳实对照药材溶液点样量为2-6μl。

33、优选地，步骤（2）中，所述蒲公英对照药材溶液的制备方法为：取蒲公英对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液作为蒲公英对照药材溶液。

34、进一步优选为：取蒲公英对照药材0.2g，加80%甲醇2ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为蒲公英对照药材溶液。

35、优选地，步骤（2）中，所述菊苣酸对照品溶液的制备方法为：取菊苣酸对照品加甲醇，作为菊苣酸对照品溶液。

36、进一步优选为：取菊苣酸对照品加甲醇制成每1ml各含0.6mg的溶液，作为菊苣酸对照品溶液。

37、优选地，步骤（2）中，氨气熏5min后喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视。

38、优选地，步骤（2）中，所述供试品溶液a点样量为2-6μl所述蒲公英对照药材溶液点样量为2-6μl。

39、优选地，步骤（2）中，所述薄层板平衡饱和30min以上。

40、优选地，步骤（3）中，所述白术对照药材溶液的制备方法为：取白术对照药材加乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液作为对照药材溶液。

41、进一步优选为：取白术对照药材0.25g，加乙酸乙酯4 ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为白术对照药材溶液。

42、优选地，步骤（3）和步骤（5）中，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，所述加热的温度为60℃。

43、优选地，步骤（3）中，所述供试品溶液a点样量为2-6μl；所述白术对照药材溶液点样量为4-8μl。

44、优选地，步骤（4）中，所述酸枣仁对照品溶液的制备方法为：取酸枣仁皂苷a对照品、酸枣仁皂苷b对照品，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的混合溶液，作为酸枣仁对照品溶液。

45、优选地，步骤（4）中，所述供试品溶液c点样量为2-6μl；所述酸枣仁对照品溶液点样量为4-6μl。

46、优选地，步骤（5）中，所述柴胡对照药材溶液的制备方法为：取柴胡对照药材加甲醇，超声处理，滤过，上清液作为柴胡对照药材溶液。

47、进一步优选为：取柴胡对照药材0.25g，加甲醇8ml，超声处理20分钟，滤过，上清液作为柴胡对照药材溶液。

48、优选地，步骤（5）中，所述柴胡皂苷对照品溶液的制备方法为：分别取柴胡皂苷a、d对照品加甲醇制成每1ml含0.125mg的溶液，作为柴胡皂苷对照品溶液。

49、优选地，步骤（5）中，显色清晰超过2h后，置紫外光灯下检视。

50、优选地，步骤（5）中，所述供试品溶液c点样量为2-6μl；所述柴胡对照药材溶液点样量为2-8μl；所述柴胡皂苷对照品溶液点样量为2-6μl。

51、优选地，步骤（6）中，所述芍药苷对照品溶液的制备方法为：取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.65-1mg的溶液，作为芍药苷对照品溶液。

52、优选地，步骤（6）中，所述供试品溶液c点样量为2-6μl；所述芍药苷对照品溶液点样量为2-6μl。

53、优选地，步骤（2）、步骤（3）和步骤（5）中，所述紫外光的波长是365nm。

54、本发明的有益效果为：

55、（1）本发明提供了针对四逆散加减颗粒的质量控制方法，填补了当下四逆散加减颗粒质量控制的空缺。

56、（2）本发明针对柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等成分建立特定的提取制备工艺，能够从颗粒剂的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分，在保证鉴定效果的基础上，实现2种样品即可同时检测多种中药成分，并在不同质控环境下验证了所建立的薄层鉴别方法的稳定性和重复性。

57、（3）本发明针对四逆散加减颗粒的药味组成，分别选择了特定的展开剂，无干扰，检测效果好。

58、（4）本发明针对四逆散加减颗粒的药味组成，以及各个供试品溶液的特点，分别选择了特定的显色方法。

59、（5）本发明能够在一个薄层板上同时检测枳实和丹参成分，提高了检测效率，为二者检测提供一种高效的检测条件。

60、（6）本发明不使用有害溶剂，同时大大减少了溶剂用量（使用十分低的提取溶剂）具有简化质量检测、环保、节省成本、提高检测效率的技术效果。