图8示出了在暴露于UV-A辐射（365nm)之后24小时的成纤维细胞ECAR响应。图 8中示出的24小时值是通过将成纤维细胞暴露于UV-B辐射，然后以37°C和5%CO2温育平 板24小时获得的。暴露于UV-A之后二十四小时，根据下文的"测试方法"中描述的方法分 析了细胞。在图表99的最左侧显示了 24小时基础ECAR值90。基础值90右侧紧接的是关 于lj/cm2剂量的UV-A辐射的24小时响应ECAR值91，然后是关于5J/cm2剂量的24小时 响应ECAR值92。图表99的最右侧是关于10J/cm2剂量的24小时响应ECAR值93。如图8 所示，成纤维细胞似乎仅在lOJ/cm2的剂量表现出24小时后ECAR的降低。因此，当筛选抵 抗UV-A辐射对成纤维细胞糖酵解的效应的护肤活性物质时，根据UV-A的剂量，暴露后的时 间（尤其是多至24小时或更长）可以是要考虑的重要因素。
[0062] 个人护理组合物以及伸用其的方法
[0063] 由于健康的皮肤细胞提供的皮肤健康和/或外观有益效果，可能期望将根据本文 的方法鉴定的一种或多种护肤活性物质掺入化妆品组合物。即，可能期望根据本文的方法 鉴定护肤活性物质，并将所述护肤活性物质作为成分包括在化妆品组合物中。此类化妆品 组合物可包括皮肤病学可接受的载体以及护肤活性物质（诸如烟酰胺），该护肤活性物质 降低、防止和/或逆转氧化应激反应对角质细胞、成纤维细胞和/或通常存在于皮肤中的其 他类型细胞（例如，黑素细胞、肌细胞、干细胞、皮脂腺细胞、神经细胞、和脂肪细胞）的不期 望的代谢效应。本文的化妆品组合物可包括通常被包括在被提供的特定化妆品组合物中 的类型的一种或多种任选的成分。例如，所述化妆品组合物可包括另外的已知用于调节和 /或改善哺乳动物皮肤的状况的护肤活性物质。此类任选的成分的非限制性示例包括润肤 剂、湿润剂、维生素；肽；和糖胺。其他任选的成分包括防晒活性物质（或防晒剂）和/或紫 外线吸收剂。在某些实施例中，所述化妆品组合物可包含着色剂、表面活性剂、成膜组合物、 和/或流变改性剂。本文的合适的化妆品组合物可以是本领域中已知的多种形式中的任何 一种，包括，例如，乳液、洗剂、乳、液体、固体、霜膏、凝胶、摩丝、膏剂、糊剂、精华液、棒状物、 喷雾、滋补剂、气溶胶、泡沫、笔状物等。所述化妆品组合物还可以被掺入到剃刮准备产品 中，包括，例如，凝胶、泡沫、洗剂、和霜膏，并且包括气溶胶和非气溶胶型式。其他化妆品组 合物包括止汗剂、除臭剂、和个人清洁组合物（诸如皂和洗发剂）。化妆品组合物和适合用 于其中的任选成分的非限制性示例描述于Ha等人2010年1月21日提交的美国专利公布 2010/0239510 中。
[0064] 掺入了通过本文所述的新方法鉴定的护肤活性物质的组合物可大体按照制备组 合物和局部用组合物的领域中已知的常规方法制备。此类方法通常涉及在一个或多个步 骤中将成分混合至相对均一的状态，可使用或不使用加热、冷却、施加真空等。例如，通过 首先独立于脂肪相材料而混合水相材料，然后适当地混合脂肪相材料和水相材料以得到 所期望的连续相，可制备乳液。在某些实施例中，可制备所述组合物以提供活性物质材料 的适当的稳定性（物理稳定性、化学稳定性、光稳定性等）和/或递送。所述组合物可以 在尺寸被设定成贮存用于一个处理周期的足够量的组合物的包装中被提供。包装的尺 寸、形状、和设计可能变化很大。一些包装的示例描述于美国专利D570, 707 ;D391，162 ; D516, 436 ;D535, 191 ;D542, 660 ;D547, 193 ;D547, 661 ;D558, 591 ;D563, 221 ;和美国专利公 布 2009/0017080 ;2007/0205226 ;以及 2007/0040306 中。
[0065] 本文所公开的个人护理组合物可以改善皮肤弹性、改善水合、调节或改善皮肤状 况、维持或改善皮肤老化迹象、或者维持或改善受侵害的角质组织的量和频率被施用于皮 肤。例如，可能期望鉴定需要护肤有益效果的目标皮肤区域，将美容上安全且有效量的所述 个人护理组合物施用于所述目标区域。在一些情况下，护肤组合物可被用作用于整个面部 的专门处理，集中应用于带有表情纹、皱纹、不期望的色调或斑点的区域。另外，通过向需要 此类处理的哺乳动物皮肤局部施用安全且有效量的护肤组合物，本文的个人护理组合物可 用于产生长期和/或短期的皮肤或美容有益效果。
[0066] 测试方法
[0067] 本方法允许在控制环境中对与氧化磷酸化和糖酵解代谢途径相关联的代谢指标 的非致死的、同时的检测。本方法还允许对动力学数据的收集。当评估对紧张性刺激或受 试试剂的代谢响应时，重要的是同时评估两种代谢途径，以了解这两种代谢途径如何与紧 张性刺激或受试试剂和/或与彼此相互作用。另外，重要的是实时（即，反复周期性地测 量）监控代谢途径，以观察当使用仅提供静态数据的方法时可能被错过的趋势和/或瞬时 响应。因此，破坏性检测不适合用于本文，因为它们通常仅允许单种测量。
[0068]另外重要的是在控制环境中检测代谢指标，以降低引入伪迹的可能性。合适的控 制环境应当最小化或防止外部环境条件（例如，温度、压力、湿度、光照、和与不期望的气 态、液态和/或固态污染物的接触）的任何不期望的影响。例如，如果被检测的代谢指标是 氧气消耗速率而受试样品对环境开放，所测量的氧气浓度可能没有准确地反映细胞所消耗 的氧气的量，因为至少一些被消耗的氧气可被环境的氧气代替。另外，测试方法自身不应当 向测量中引入伪迹。例如，已知Clark电极消耗氧气，这恰好是它应当检测的东西。因此，通 过Clark电极装置测量的氧气浓度可能没有正确地反映测试中的细胞所消耗的氧气的量。
[0069]应当理解，环境变化（诸如培养基的温度变化）可导致不期望的测量误差。具体 地，培养基容纳溶解的气体的能力随着温度变化，并从而可导致溶解的气体浓度随着培养 基趋于与周围环境的平衡而明显地改变。另外，至少一些类型的传感器的测量性能可随着 温度变化。因此，可能尤其期望控制诸如测试容器中的培养基和/或周围环境的温度的环 境条件，或对测量应用校正因子。相似地，由于诸如湿度或暴露于空气流的其他非控制环境 条件导致的任何从培养基的蒸发可人为地影响由各种传感器（包括溶解的气体、离子、和 温度的那些）进行的测量。因此，提供控制环境以最小化或消除这些因子能够是重要的。
[0070] 在一些情况下，用于检测代谢参数的设备可包括适用于接收容纳细胞的测试容器 (例如，多孔微孔板）的台。所述设备还可包括被配置为接收用于将测试容器内的环境与外 部环境分隔的阻隔的活塞。所述阻隔可被配置为与测试容器的一部分机械式协作，以密封 测试容器的开口，例如，通过与测试容器壁中的座或台阶配合。除此之外或作为另外一种选 择，所述活塞和阻隔可被配置为减少和/或扩展测试容器的体积和测试容器内包括细胞的 至少一部分（例如5-50%)的培养基的体积。例如，所述阻隔可通过所述台和活塞的相对 运动被插入和/或缩出测试容器。在一些实施例中，所述方法可包括通过所述容器灌注附 加的培养基和/或补充培养基。减小培养基的体积使得能够在较大体积的细胞培养基中临 时形成高度浓缩的细胞的体积，以改善传感器检测培养基内由细胞的生物学活性导致的代 谢指标的敏感变化的能力。通过临时地而非永久性地减小培养基体积（并从而浓缩细胞/ 培养基混合物），细胞被暴露于非正常的环境仅仅一段短暂的时间，并从而可不被测量过程 有害地影响（例如，杀死）。
[0071]所述设备还可包括能够分析所期望的代谢指标的传感器。在一些实施例中，传感 器可被设置在阻隔和/或活塞上。传感器应当处于与培养基的传感通讯中，并被配置为检 测所期望的代谢指标。传感器可被配置为感测所述代谢指标的存在和/或浓度；感测所述 代谢指标的浓度的变化速率；和/或感测第一代谢指标的第一浓度、感测第二代谢指标的 第二浓度、和确定所述第一浓度和第二浓度之间的关系。可能期望将传感器配置为检测所 述代谢参数而不干扰细胞。所述设备还可包括被设置程序为自动操作所述测试的一个或多 个方面（包括数据采集和记录、通过一个或多个测试步骤的循环和将受试试剂或紧张性刺 激转移至细胞外环境）的计算机。在一些实施例中，传感器可联接到计算机。
[0072] 提供控制环境的设备的合适的非限制性示例、对代谢指标的非致死和同时检测、 和动力学数据公开于美国专利7, 276, 351 ;7, 638, 321 ;和授予Teich等人的7, 851，201 ; 以及授予Neilson等人的美国专利8, 202, 702中。尤其合适的装置是可购自Seahorse Bioscience,Massachusetts的XFExtracellularFluxAnalyzer(XF细胞外流量分析仪）。
[0073]细朐培养和样品制各
[0074] 将要根据本文的方法被测试的细胞可通过本领域中已知的任何合适的方法获 得。例如，细胞可分离自天然环境（例如，人的皮肤）或购自合适的商业来源。细胞可以 是原发细胞系（即，分离自生物组织源并在正常的组织培养条件下增殖的细胞系）或无限 增殖化细胞系（即，通过化学或遗传修饰被改变，使得其增殖和倍增指数显著高于从原发 细胞系所能得到的细胞系）。在一些实施例中，可以从合适的商业来源获得冷冻的原发细 胞系或无限增殖化细胞系，并用适当的生长培养基稀释至组织培养瓶中（例如，可购自BD Biosciences的涂覆有胶原的T-75瓶）用于温育（例如，在37°C)。一旦细胞准备好用于 测试，即可将它们置于合适的测试容器中（例如，多孔容器、单孔容器、一个或多个管、和常 规测试平板诸如12孔板、96孔板等）。测试培养基可在测试容器中被提供，以形成细胞外 环境。测试容器应当保持细胞至少在测试持续时间内（例如，至少4小时、8小时、12小时、 24小时、48小时或72小时）内存活和健康。每一孔中细胞的数量应当足够进行合适的测 量（例如，就角质细胞而言4X104细胞/孔以及就成纤维细胞而言1X10 5细胞/孔）。应 当理解，在测试过程中，细胞可以被悬浮在测试培养基中、附着在设置于测试容器中的合适 的基质上和/或附着在测试容器上。
[0075] 以举例的方式，上文关于图认、川、1(：、2、34、38、3(：和4所论及的角质细胞是从 GibcoLifeSciences获得的冷冻的人类主要的角质细胞。角质细胞在补充有人类角 质细胞生长补充剂和庆大霉素/两性霉素BX500溶液（二者均可购自Invitrogen)的 EpiLitV'品牌角质细胞培养基（可购自Invitrogen,GrandIsland,NY)中生长至70-80% 聚集。对于每一测试，培养了两个单独的供体的角质细胞，并将每一供体的相等数量的细胞 混合在测试容器中。在该示例中，来自每一供体的2XIO4个角质细胞被置于涂覆有明胶的 24孔板中，每一孔总共大约4XIO4个角质细胞。存在的细胞的数量可通过本领域中已知的 任何合适的方法测定（例如，使用Coulter计数器）。在测试前24小时将角质细胞置于涂 覆有明胶的平板中，并将100yL的上文所述的角质细胞培养基添加至每一孔。测试培养基 是通过改性缺少缓冲液、钙、葡萄糖、丙酮酸、和谷氨酰胺的可商购获得的EpiLifek培养基 制备的。￡口丨1^€615培养基是通过添加1〇1^/1111胰岛素；10叩/1]11氢化可的松 ；6〇1^氯化 钙；IOmM葡萄糖；ImM丙酮酸；和2mM谷氨酰胺改性的。将测试培养基加热至37°C并用氢氧 化钠将PH调节至7. 4。在进行测量前1小时，用测试培养基替换了孔中的角质细胞培养基