一种地表水体中环境雌激素的共检测方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及地表水体中环境雌激素的共检测方法。
【背景技术】
[0002] 环境雌激素（EEs)是指一类进入机体后，具有干扰生物正常内分泌物质代谢过 程，破坏机体稳定性作用的化合物，包括多氯联苯、二恶英、双酚和烷基酚、酞酸酯、类固醇 等几类化合物。这些物质在环境中极其微量的存在都有可能对生态系统及人类健康造成潜 在危害。这类物质能在极低浓度（ng/L级别或以下）下产生内分泌干扰效应，从而对人体、 家畜、野生动物的健康和繁衍产生潜在的不利影响。人与动物卵巢分泌的天然类固醇类雌 激素雌酮（El)、17p-雌二醇（E2)、雌三醇（E3)，以及作为口服避孕药主要成分的合成雌 激素17a-乙炔基雌二醇（EE2)，会随着粪尿排放进入地表水中。双酚类化合物BPA、BPS、 BPAF是生产聚碳酸酷和环氧树脂等的重要原料，广泛应用于工业及生活中。这些物质通过 人为或自然途径进入到环境中，从而导致其在环境中被广泛检出。为保障居民饮用水安全， 需要建立一种回收率高、灵敏度高、重复性好且自动化程度高的前处理和仪器分析技术，用 于快速、精确地同时检测地表水中多种痕量存在的环境雌激素含量，掌握其迀移变化规律。
[0003] 雌酮（E1)、雌二醇（E2)、雌三醇（E3)和乙炔雌二醇（EE2)及3种双酚类化合物双 酚A(BPA)、双酚AF(BPAF)、双酚S(BPS)分子结构图如图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8 :
[0004] 由于环境中雌激素浓度非常低，所以必须对样品进行处理，使目标污染物富集浓 缩。处理是样品分析中最重要也是最耗时的过程之一。处理方法的选择在提高方法灵敏度、 减少干扰方面起着非常重要的作用。常用的水样预处理方法有固相萃取法（SPE)和液液萃 取法（LLE)等。离线固相萃取需要消耗大量样品及试剂，流程复杂，干扰因素多，损失较大。 除了有效的预处理过程外，高选择性的分离过程及灵敏的检测过程也是必须的。目前常用 的检测方法有液相色谱法（紫外或荧光检测器）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS)、气相色 谱-质谱联用法（GC-MS)和免疫测定法等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是为了解决处理过程时间长，离线固相萃取方法消耗大量样品及试 剂，流程复杂，干扰因素多，损失较大的问题，而提出了一种地表水体中环境雌激素的共检 测方法。
[0006] 上述的发明目的是通过以下技术方案实现的：
[0007] 步骤一、样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，用盐酸酸化，加入内标物质， 得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4°C的环境，并在48h内进 行检测；
[0008] 步骤二、过滤富集：将保存的待检测地表水体样品通过玻璃纤维滤膜进行过滤，过 滤后的待检测地表水体样品由自动进样器进样到在线固相萃取装置柱中，通过在线固相萃 取装置柱进行富集纯化；
[0009] 步骤三、检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表 水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测 限、定量及定性结果；
[0010] 步骤四、利用分析天平准确称量7种环境雌激素，溶于色谱纯甲醇内，配置成系列 浓度的标准溶液，采用超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积 为纵坐标进行线性回归，得到标准曲线；
[0011] 步骤五、将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的 标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；
[0012] 所述一种地表水体中环境雌激素包括雌酮、17p-雌二醇、雌三醇，17a-乙炔基 雌二醇、双酚类化合物BPA、双酚类化合物BPS和双酚类化合物BPAF7种环境雌激素；
[0013] 双酚类化合物BPA为双酚A、双酚类化合物BPS为双酚S，双酚类化合物BPAF为双 酚AF。
[0014] 发明效果
[0015] 在线固相萃取系统可以自动进行分析物提取、浓缩、清洗、分离和检测。极大程度 地缩短了水样富集浓缩所需的时间，减少水样消耗的体积，水样损失小，使得水样的采集和 储存更为方便。与离线样品富集方案相比，该系统所能获得的高在线样品浓度和高信噪比 可以显著降低分析时所需的样品量和工作量。
[0016] 超高效液相色谱（UPLC)能减少有机溶剂的消耗量，缩短检测时间，弥补了液相色 谱的不足。而串联质谱的使用能极大程度地提高目标污染物定性和定量的准确性，排除干 扰，适用于实际水体的分析。
[0017] 并利用选择全扫描检测模式（MRM)来进行定性定量检测，每种物质都对其特定的 一对或者几对母离子和子离子进行检测，可以有效地排除干扰物质的干扰，因此提高了检 测的灵敏度和定性定量的准确度。如表一：
[0018] 表一不同目标物回收率
[0019]
[0020] 本课题利用在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术对所选环境雌激素进 行定性和定量分析，建立了灵敏、高效的分析方法。而在线固相萃取可同时执行洗脱和调节 任务，耗样量少，自动化程度高，可以减少总循环时间并且可以保证高回收率。如表二：
[0021] 表二不同目标物的检测限（单位：ng/L)
[0022]
[0023] L0D是检测限，L0Q是定量限。
【附图说明】
[0024] 图1为本发明流程图；
[0025] 图2为雌酮（E1)的分子结构图；
[0026] 图3为雌二醇（E2)的分子结构图；
[0027] 图4为雌三醇（E3)的分子结构图；
[0028] 图5为乙炔雌二醇（EE2)的分子结构图；
[0029] 图6为双酚类化合物双酚A(BPA)的分子结构图；
[0030] 图7为双酚类化合物双酚S(BPS)的分子结构图；
[0031 ] 图8为双酚类化合物双酚AF(BPAF)的分子结构图；
[0032] 图9为双酚类化合物双酚A(BPA)的定量离子峰；
[0033] 图10为双酚类化合物双酚S(BPS)的定量离子峰；
[0034] 图11为雌三醇（E3)的定量离子峰；
[0035] 图12为雌二醇（E2)的定量离子峰；
[0036] 图13为双酚类化合物双酚AF(BPAF)的定量离子峰；
[0037] 图14为乙炔雌二醇（EE2)的定量离子峰；
[0038] 图15为雌酮（E1)的定量离子峰。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0039] 一：结合图1说明本实施方式，本实施方式的一种地表水体中环境 雌激素的共检测方法，具体是按照以下步骤制备的：
[0040] 步骤一、样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，用盐酸酸化，加入内标物质， 得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4°C的环境，并在48h内进 行检测；
[0041] 步骤二、过滤富集：将保存的待检测地表水体样品通过玻璃纤维滤膜进行过滤，过 滤后的待检测地表水体样品由自动进样器进样到在线固相萃取装置柱中，通过在线固相萃 取装置柱进行富集纯化；
[0042] 步骤三、检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表 水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测 限、定量及定性结果；
[0043] 步骤四、标准曲线的绘制，以内标法进行定量测定；
[0044] 利用分析天平准确称量7种环境雌激素，溶于色谱纯甲醇内，配置成系列浓度的 标准溶液，采用超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐 标进行线性回归，得到标准曲线，用于测定7种环境雌激素的含量；
[0045] 步骤五、将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的 标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；
[0046] 所述一种地表水体中环境雌激素包括雌酮、17p-雌二醇、雌三醇，17a-乙炔基 雌二醇、双酚类化合物BPA、双酚类化合物BPS和双酚类化合物BPAF7种环境雌激素；
[0047] 双酚类化合物BPA为双酚A、双酚类化合物BPS为双酚S，双酚类化合物BPAF为双 酚AF。
【具体实施方式】 [0048] 二：本实施方式与一不同的是：所述步骤一中样品采 集及预处理：量取地表水体原水水样，并用盐酸酸化，加入内标物质，得到待检