O型口蹄疫病毒抗体检测卡的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种检测卡，特别是涉及一种用于快速定量检测猪血清中O型口蹄疫病毒抗体的检测卡。
【背景技术】
[0002]口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDisease Virus，FMDV)引起的偶蹄动物(猪、牛、羊、骆驼等)共患的一种急性、热性、高度传染性疫病，其特征是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房等发生水泡，并溃痒形成烂斑。该病传播途径多、速度快，流行区域广，能造成巨大的政治、经济损失，世界动物卫生组织(OfficeInternat1nal des Epizooties,OIE )将其列为A类动物疫病。我国政府也将其排在14个一类动物传染病的第一位。目前，大部分OIE成员国都流行FMD，这不仅制约了畜牧业的发展而且还造成畜产品进出口市场的关闭和消费者的恐慌。FMD已经时刻威胁着那些无FMD国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。例如，2001年英国暴发FMD时(O型泛亚毒株入侵所致)，仅短短的7个月内就造成高达30亿英镑的政府损失和50亿英镑的私人损失。
[0003]口蹄疫由口蹄疫病毒引起，口蹄疫病毒为小RNA病毒科(Picornaviridae) 口蹄疫病毒属(Aphthovirus)的成员。口蹄疫病毒基因组为单股正链RNA，约由8500个核苷酸组成。病毒衣壳由4种结构蛋白即VPl、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成，其中VPl是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒共有7个血清型:0、A、C、Asia-1、SAT USAT 2和SAT 3型。目前7个口蹄疫病毒型中O型的流行最为广泛(世界范围内)，其次为Asia-1型和A型;C型和南非三型非常罕见，通常只在特定区域流行。
[0004]O型口蹄疫的防控主要是疫苗免疫及屠宰感染和可疑畜群，而疫苗免疫动物与感染动物体内都会产生结构蛋白抗体，因此检测结构蛋白抗体的诊断方法能确定动物对病毒株的抵抗力。同时日常监测疫苗产生抗体对于养殖场来说，对群体的日常监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映饲养场管理是否合理，也是适时注射疫苗的主要依据。
[0005]市面上有O型口蹄疫病毒抗体胶体金快速检测卡，通过对样品的检测，即可粗略判断猪体内是O型口蹄疫抗体含量，兽医根据检测结果判断是否需要注射O型口蹄疫疫苗。
[0006]同样市场上也大量使用检测O型口蹄疫抗体酶标试剂盒，即液相阻断ELISA酶标试剂盒，ELISA试剂盒需要酶标仪、温育反应条件、洗板条件，操作工作环境和专业技术人员，另外检测样本还需要复杂的前处理，如采集血液，分离血清等；而快速胶体金虽然检测方便，不需专业技术人员和工作环境，但其检测的灵敏度低，且只能定性，检测范围窄。而本实用新型专利的目的就是克服以上两类试剂盒的各自缺点，通过简单的操作，现场快速、准确、高灵敏地定量(半定量)分析，实现在养猪现场检测。
【实用新型内容】
[0007]本实用新型的目的就是提供一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡及其制备方法，能完全解决上述现有技术的不足之处。
[0008]本实用新型的目的通过下述技术方案来实现:
[0009]—种O型口蹄疫病毒抗体检测卡，包括装配在外壳内的检测卡本体，所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述标记垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球，且检测微球和质控微球的粒径均为50?500nm，所述硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。
[0010]作为优选，所述底板为PVC底板，在PVC底板上从左至右依次粘贴样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，且样品垫的右端搭在标记垫的左端上，标记垫的右端搭在硝酸纤维素膜的左端上，吸水纸左端搭在硝酸纤维素膜的右端上。
[0011 ]作为优选，所述检测微球为标记有O型口蹄疫抗原的微球，质控微球为标记有鸡IgY或兔IgG的质控微球。
[0012]作为优选，所述硝酸纤维素膜上的检测线和标记垫上采用的O型口蹄疫抗原均为灭活O型口蹄疫病毒抗原、O型口蹄疫疫苗或O型口蹄疫结构蛋白VPl、VP2和VP3的重组蛋白；所述硝酸纤维素膜上质控线采用的羊抗鸡抗体为羊抗鸡IgY的IgG或者羊抗兔lgG。
[0013]作为优选，所述标记在生物原料上的镧系荧光微球的镧系荧光是指镧系元素Eu、Sm或Tb与β— 二酮配基产生的荧光。其发光效率高、吸收光谱宽、发射光谱很窄、斯特克斯位移宽，使其荧光光谱分析的灵敏度很高。
[0014]作为优选，所述样品垫为检测血清或血浆的样品垫，或者为检测全血的样品垫。
[0015]作为优选，本检测卡利用猪血样品中O型口蹄疫病毒抗体、O型口蹄疫病毒抗原的标记物和硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫病毒抗原通过双抗原夹心法来检测猪血样本中O型口蹄疫病毒抗体。
[0016]作为优选，本检测卡为定量层析检测卡，它是通过检测仪检测层析后检测卡的检测线和质控线发出的荧光信号，然后根据此批检测卡的IC卡储存的标准曲线，再由检测线和质控线的荧光信号从标准曲线计算出待检物的浓度。
[0017]名词解释:
[0018]羊抗鸡IgY的IgG:羊抗鸡IgY的免疫球蛋白G;
[0019]羊抗兔IgG:羊抗兔IgG的免疫球蛋白G;
[0020]鸡IgY:鸡卵黄抗体；
[0021]兔IgG:兔免疫球蛋白G;
[0022]抗猪RBC:抗猪红细胞表面蛋白抗体。
[0023]与现有技术相比，本实用新型的有益效果在于:灵敏度高，检测的批内差及批间差小，有较好的重复性，性能稳定，既可检测全血样本，也可以检测血清和血浆样本，与CSFV(猪瘟病毒)、PRRSV(猪呼吸与繁殖障碍综合症耳病病毒)、PCV(猪圆环病毒)、PRV(伪狂犬病毒)、PPV(猪细小病毒)、JEV(乙脑病毒)等抗体没有交叉反应。可实现O型口蹄疫病毒抗体现场快速检测，具有较高的实用价值。
【附图说明】
[0024]图1是本实用新型的结构不意图；
[0025]图2是图1中检测卡本体的结构示意图；
[0026]图3是图2的俯视图；
[0027]图4是O型口蹄疫病毒抗体检测标准曲线。
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例和附图对本实用新型作进一步的说明。
[0029]如图1至图4所示，一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡，包括装配在外壳10内的检测卡本体，所述检测卡本体包括PVC底板I，在PVC底板I上从左至右依次粘贴样品垫2、标记垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5，且样品垫2的右端搭在标记垫3的左端上，标记垫3的右端搭在硝酸纤维素膜4的左端上，吸水纸5左端搭在硝酸纤维素膜4的右端上。所述硝酸纤维素膜4上包被O型口蹄疫抗原为检测线6，包被羊抗鸡抗体为质控线7。在外壳10上对应样品垫2开设加样孔11，对应硝酸纤维素膜4上的检测线6和质控线7开设视窗孔12。
[0030]所述硝酸纤维素膜4上质控线4采用的羊抗鸡抗体为羊抗鸡IgY的IgG或者羊抗兔IgG0
[0031 ]所述标记垫3由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，且检测微球为标记有O型口蹄疫抗原的微