特异性吸附胞外囊泡的磁性材料、制法及基于上述磁性材料对翻译后蛋白质逐级洗脱富集的方法

文档序号:39861806发布日期:2024-11-01 19:47阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,其特征在于:以磁性纳米颗粒为载体,所述磁性纳米颗粒表面接枝有用于连接磷脂双分子层的结合分子以及用于连接磷酸基团的高亲和性离子;所述磁性纳米颗粒以铁基磁性纳米粒子为核,在铁基磁性纳米粒子外包裹有羧基化或氨基化修改的二氧化硅壳层。

2.根据权利要求1所述的特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,其特征在于:所述磷酸基团高亲和性离子为钛离子或锆离子。

3.根据权利要求1所述的特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,其特征在于:其中,所述铁基磁性纳米粒子为四氧化三铁纳米粒子或三氧化二铁纳米粒子。

4.根据权利要求1所述的特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,其特征在于:所述磁性纳米颗粒的粒径为300~500nm。

5.根据权利要求1所述的特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,其特征在于:磁性纳米颗粒中,二氧化硅壳层的厚度为30~50nm。

6.根据权利要求1所述的特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,其特征在于:对于连接磷脂双分子层的结合分子,分子首端为磷脂双分子层结合分子本体,该类分子为1,2-二油酰基-sn-丙三基-3-磷脂酰乙醇胺、1-棕榈酰基-2-油酰基乙醇胺、1,2-二硬酯酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺、l-磷脂酰乙醇胺或胆固醇;磷脂双分子层结合分子本体以酰胺反应链接分子量为4000da的聚乙二醇长链,聚乙二醇长链另一端通过二硫键结合游离的羧基或氨基。

7.权利要求1所述的磁性材料的制备方法,其特征在于,具体为:将磷脂双分子层结合分子和3-磷酰基丙酸在ph=5.5~6.0的2-(n-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中进行羧基活化;活化后,与磁性纳米颗粒在ph=7.0~7.5的2-(n-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中进行酰胺反应,反应产物用水多次清洗后,加入硫酸钛或硫酸锆溶液进行反应,反应后多次清洗得到终产物。

8.基于权利要求1所述的磁性材料对翻译后蛋白质逐级洗脱富集的方法,其特征在于,具体为:将磁性材料加入到唾液、尿液、脑脊液、血浆或细胞培养液中,反应30~60分钟后,磁分离得到富集的胞外囊泡;而后进行10~15分钟裂解和9~12小时酶解,终止酶解后进行蛋白质的原位富集和不同翻译后修饰蛋白质的连续逐级洗脱,实现普通多肽、糖基化多肽和磷酸化多肽的分别富集;将依次洗脱后的产物进行液相-质谱分析,根据谱图结果得到不同翻译后修饰蛋白质的强度信息。

9.根据权利要求8所述的磁性材料对翻译后蛋白质逐级洗脱富集的方法,其特征在于:胞外囊泡分离时,尿样和细胞培养液直接进行反应;唾液用pbs缓冲液按体积比1:1~1.5稀释;脑脊液用pbs缓冲液按体积比2:1~1.5稀释;血浆用pbs缓冲液按体积比20:1~1.5稀释。

10.根据权利要求8所述的磁性材料对翻译后蛋白质逐级洗脱富集的方法,其特征在于:胞外囊泡分离时,尿样、脑脊液、唾液和细胞培养液中需加入质量分数为10~15%的占体液总体积0.1~0.2%的tritonx-100/np40溶液;血浆中加入质量分数为10~15%的占体液总体积1~1.5%的tween-20溶液。


技术总结
本发明公开了一种特异性吸附胞外囊泡的磁性材料,以磁性纳米颗粒为载体,所述磁性纳米颗粒表面接枝有用于连接磷脂双分子层的结合分子以及用于连接磷酸基团的高亲和性离子;所述磁性纳米颗粒以铁基磁性纳米粒子为核,在铁基磁性纳米粒子外包裹有羧基化或氨基化修改的二氧化硅壳层。本发明还公开了上述磁性材料的制备方法和基于磁性材料对翻译后蛋白质逐级洗脱富集的方法。本发明磁性纳米材料能够用于胞外囊泡特异性分离和下游蛋白质原位富集及不同翻译后修饰蛋白逐级洗脱,具有检测成本低、快速、高灵敏性以及重复性好的优点。

技术研发人员:谢卓颖,孙杰,蔡雨含,邓媛媛,顾忠泽
受保护的技术使用者:东南大学
技术研发日:
技术公布日:2024/10/31
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