天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用
【专利说明】
[0001]
技术领域
[0002] 本发明涉及天目琼花应用领域，具体为天目琼花醇提物在治疗非酒精性脂肪肝药 物中的应用。
【背景技术】
[0003] 非酒精性脂肪性肝病（NAFLD)是无过量饮酒史，但肝脏组织学病变与酒精性肝病 相似的临床综合症，可发展为肝硬化和肝癌。近年来随着生活水平的提高，NAFLD的发病率 逐年攀升，普通人群中约有14%至24%患有NAFLD，已成为最常见的肝脏疾患之一。目前， 限制热量摄取和运动是治疗NAFLD唯一有效的手段，但对多数患者而言常难以坚持，因此， 寻找有效的药物治疗NAFLD十分必要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对目前非酒精性脂肪肝病缺乏高效又安全的药物，提供传统中 药天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝病药物中的新用途。
[0005] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：天目琼花醇提物在制备治疗非酒精 性脂肪肝病药物中的应用。
[0006] 所述醇提物的提取方法为：将天目琼花果实常温晒干，然后研磨成40目粗粉，取 500g粉末于95%的乙醇中提取，所述粉末与乙醇的质量体积比为1 :10,醇提物过滤后浓缩 成浸膏，每克浸膏相当于3. 49g生药，然后将浸膏用5%的羧甲基纤维素钠分别配制成2.5g 生药/ml，5.0g生药/ml，lO.Og生药/ml，4°C保存备用。
[0007] 天目琼花，为忍冬科（Caprifoliaceae)荚莲属（ViburnumL.)落叶灌木，生于山 坡、灌丛和路旁等地，原产于东北、华北等地。果实及枝叶均可入药，主要用于抗抽搐、抗痉 挛、镇静及兴奋子宫。天目琼花果实营养丰富，其中氨基酸、维生素和微量元素含量较高。我 国民间流传许多关于天目琼花的配方，用于治疗咳嗽、疮疥和腰腿痛等，因此可大力挖掘其 药用价值。研究证实，天目琼花富含多种有效成分，黄酮和萜类物质作为其主要成分，具有 显著的抗氧化和抗炎作用。本课题组研究证实：天目琼花富含槲皮素等黄酮类物质，并显著 降低高脂饲养apoE-/-小鼠血脂。黄酮类物质可减轻ox-LDL所诱导的Raw264. 7细胞内脂 质蓄积，提示天目琼花可能具有调控脂质沉积功能。由于肝内脂质沉积、氧化应激和炎症反 应与非酒精性脂肪肝密切相关，故推测天目琼花具有防治NAF-LD的作用。经我科研团队 证实天目琼花对NAFLD有较好的防治效果，明显减轻了肝细胞脂肪病变、坏死和损伤，降低 了肝内脂质沉积和氧化应激水平。
[0008] 本发明开发了一种防治非酒精性脂肪肝病的新药物：天目琼花醇提物。本发明采 用高脂饮食诱导的apoE/小鼠NAFLD模型，以辛伐他汀作为阳性对照药，给予天目琼花醇 提物口服8周后，观察了它对NAFLD的影响，实验结果发现，天目琼花醇提物对防治非酒精 性脂肪肝病有明显的效果。
[0009] 本发明还发现了天目琼花醇提物的新用途：治疗非酒精性脂肪肝病，进一步挖掘 了天目琼花的生物活性，扩大了该中药的应用范围。
[0010] 天目琼花醇提物制备方法简单，成本较低，且毒副作用小，具有良好的治疗非酒精 性脂肪肝病的优势。
【附图说明】
[0011] 图1各组apoE7小鼠肝组织的HE染色切片和肝损伤情况（n= 8)。在高脂喂 饲的apoE/小鼠中，天目琼花醇提物改善了脂肪肝的病理学变化，减轻了肝损伤。A为HE 染色显示各组小鼠肝损伤情况；B和C分别为天目琼花对小鼠肝组织ALT和AST的影响。 和对照组比较；#尸汲版和模型组比较。
[0012] 图2在高脂喂饲的apoE/小鼠中，天目琼花醇提物调节了肝内胆固醇代谢，明显 减轻了肝内脂质沉积（n= 8)。口服天目琼花醇提物8周后，apoE7小鼠肝脏内的总胆固醇 (TC)，游离胆固醇（FC)，胆固醇酯（CE)和甘油三酯（TG)水平通过酶法测定。A，肝脏TG水 平；B，肝脏TC水平；C，肝脏FC水平；D，肝脏EC水平。人和对照组比较；#/\%版 和模型组比较。
[0013] 图3在高脂喂饲的apoE/小鼠中，天目琼花醇提物降低了血清和肝脏氧化应激 水平（n= 8)。A，血清MDA含量；B，血清S0D活性；C，肝脏MDA含量；D，肝脏S0D活性。 和对照组比较汲版，汲似，和模型组比较。
【具体实施方式】
[0014] 一，材料和方法 (一）天目琼花醇提物的制备 天目琼花果实采自泰山，由泰山医学院中药学资深专家李同德教授鉴定。天目琼花果 实晒干后研磨，取粉末500g于95%的乙醇回流提取（m:v=l: 10)。醇提物过滤后浓缩成浸膏 (3. 49g生药/g)，将浸膏用5%的羧甲基纤维素钠分别配制成2. 5g生药/ml，5. 0g生药/ ml，10. 0g生药/ml，4°C保存备用。
[0015](二）动物分组及处理 40只雄性apoE7小鼠（18±22g，7周龄）购自北京华阜康生物科技有限公司，适应性 饲养1周后随机分为5组： 模型组(高脂饮食：10%猪油+10%蛋黄粉+ 0. 30%胆固醇）； 天目琼花低剂量组(高脂饮食+2. 5g生药/kg/d); 天目琼花中剂量组(高脂饮食+5g生药/kg/d); 天目琼花高剂量组(高脂饮食+l〇g生药/kg/d); 辛伐他汀组(高脂饮食+辛伐他汀20mg/kg/d)， 另取C57BL/6J雄性小鼠8只作为对照组(普通饮食)。
[0016] 天目琼花和辛伐他汀均溶于5%的羧甲基纤维素钠中，其终浓度分别为天目琼花 2. 5g生药/ml，5. 0g生药/ml，10. 0g生药/ml和辛伐他汀20. 0g生药/ml，药物拌于饲料 中喂伺8周。
[0017] 8周后，动物禁食12小时，通过盐酸氯胺酮静脉注射全麻后处死。心脏穿刺取血并 离心出血清。肝脏取出后立刻用冰生理盐水清洗，一部分立即放于-80°C保存备用，另一部 分放于10%的甲醛溶液中固定进行组织病理学分析。
[0018](三）血脂分析 天目琼花或辛伐他汀喂饲8周后，通过酶法（Biosino)测定血浆总胆固醇（TC)、高密度 脂蛋白胆固醇（HDL-C)、低密度脂蛋白（LDL-C)和甘油三酯（TG)。
[0019](四）血浆与肝脏中谷丙转氨酶（ALT)和谷草转氨酶（AST)活性分析 血浆ALT、AST的活性反映了肝细胞损伤的程度，根据试剂说明书(南京建成科技有限 公司）使用自动生化分析仪（7600-020,Hitachi)检测血浆与肝脏中的ALT和AST。
[0020](五）肝组织病理学分析（HE染色） 新鲜的肝组织放于10%的甲醛溶液中固定后，进行常规组织学处理，然后石蜡包埋。石 蜡切片（5ym)后用苏木素和伊红染色（HE染色）进行组织