降低组织和/或器官移植性免疫排斥的方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域。具体地，本发明涉及一种抑制组织或器官移植后免疫 排斥反应的方法和药物组合物。
【背景技术】
[0002] 反应免疫体系中各成员（抗原、免疫分子、免疫细胞、免疫组织）之间相互依赖，相 互影响和相互作用的一种免疫学现象。免疫反应可分为非特异性免疫反应和特异性免疫反 应。非特异性免疫构成人体防卫功能的第一道防线，并协同和参与特异性免疫反应。特异 性免疫反应可表现为正常的生理反应，异常的病理反应W及免疫耐受。按介导效应反应免 疫介质的不同，特异性免疫反应又可分为致敏T细胞介导的细胞免疫反应和抗体介导的体 液免疫反应。
[0003] 当病原体或异物侵入人体后，激化人体内的淋己细胞产生体液免疫和细胞免疫。 表现为免疫细胞分裂繁殖，产生淋己因子，合成并分泌抗体，也可表现为免疫耐受性、超敏 反应、移植排斥等。B淋己细胞通过产生针对外来抗原的免疫球蛋白抗体实施体液免疫。送 些抗体包括IgMJ曲、IgGJ姐和IgA五种。一般说来，感染早期先产生IgM,然后出现IgG, 送一时间顺序有助于区别近期感染和既往感染。如可W推测甲肝病毒或己肝病毒核必抗原 IgM抗体阳性者的感染发生在6个月W内。IgA抗体可对黏膜表面的病原体产生中和作用， 而I姐常常涉及过敏反应和对寄生虫感染的免疫。
[0004] T淋己细胞是免疫系统中不可或缺的调节细胞。细胞表面具有CD4+标记的T淋己 细胞可通过与细胞的直接结合，或分泌能促进细胞增殖的细胞素（cytokine)来激活B淋己 细胞、单核细胞和其他T细胞，从而促进免疫反应。表面具有CD8+的细胞毒性T细胞可溶解 带有外来蛋白质的细胞或病毒，同样，送类细胞也能通过抑制效应细胞的活性来调控免疫。
[0005] 移植免疫是指在组织移植或器官移植中，受者接受供者的移植物后，受者的免疫 系统与供者的移植物相互作用而发生的免疫应答。
[0006] 免疫排斥是指机体对移植物（异体细胞、组织或器官）通过特异性免疫应答使其 破坏的过程。一般是指移植术后，受者可识别移植物抗原并产生应答，移植物中免疫细胞 也可识别受者抗原组织并产生应答。在同种异体移植中，排斥反应有两种基本类型：宿主 抗移植物反应化OSt versus graft reaction, HVGR)和移植物抗宿主反应（graft versus host reaction, GVHR)，临床最多见的是前者。
[0007] 受者进行同种异体组织或器官移植后，外来的组织或器官等移植物作为一种"异 己成分"被受者免疫系统识别，后者发起针对移植物的攻击、破坏和清除，送种免疫学反应 就是移植排斥反应。
[0008] 器官移植已成为治疗多种终末期疾病的有效手段，但也面临若干亟待解决的难 题。目前临床上主要从严格选择供者、抑制受者免疫应答、诱导移植耐受W及加强移植后的 免疫监测等来防治移植排斥反应发生。送些非特异性的免疫抑制治疗方案虽然对防治急性 排斥反应有较好效果，但对防治慢性排斥并无明显疗效。此外，非特异性免疫抑制剂的服 用同时也直接导致了对正常免疫系统的破坏，从而造成服用免疫抑制剂的移植术后患者时 时刻刻面临人为的免疫力低下的危险境况，送不但对其健康本身有着很大的威胁，高昂的 免疫抑制剂费用更是器官移植术后患者沉重的经济负担。
[0009] 因此，在供器官严重不足、临床器官移植排斥治疗方案又不能确保少数能得到供 器官的移植受者及移植物长期存活的情况下，如何在控制急性排斥反应的同时有效防治 慢性排斥，提高受者及移植物长期存活和受者生活质量，是器官移植面临的巨大问题。故本 领域迫切需要开发一种不影响患者本身免疫力的改善术后免疫排斥的方法。
【发明内容】
[0010] 本发明提供了一种通过降低供体组织相容性抗原免疫原性从而改善移植免疫排 斥的方法及其应用。
[0011] 本发明第一方面，提供了 一种主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex, MHC)基因或其蛋白的抑制剂的用途，用于（a)制备治疗组 织和/或器官移植性免疫排斥的药物组合物；和/或化）制备降低组织和/或器官移植供 体主要组织相容性复合物基因表达量的药物组合物。
[0012] 在另一优选例中，所述的组织和/或器官包括在体的、和/或离体的。
[0013] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物基因或其蛋白来源于哺乳动物， 较佳地，来源于人、鼠或兔；更佳地，当来源于人时，所述的主要组织相容性复合物为人类白 细胞抗原（Human Leuko巧te Antigen, HLA)。
[0014] 在另一优选例中，所述的组织和/或器官包括肝脏、肾脏、必脏、肺、脾脏、胸腺、膜 脏、胃、乳腺、宫颈、口腔、咽、食道、小肠、大肠、血管、软骨、骨、淋己组织、脑、脊髓、脑神经、 脊神经、植物性神经、鼻腔、咽、喉、气管、支气管、颈、性腺、输尿管、膀脫、尿道；较佳地，包括 肝脏、肾脏、必脏、肺。
[0015] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物为人类白细胞抗原化Uman leukocyte antigen, HLA)基因。
[0016] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物包括其基因全长序列或其cDNA 序列。
[0017] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物的编码序列如SEQ ID NO. :3所示 (大鼠）。
[0018] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物的编码序列如SEQ ID NO. :8、11、 14所示（人）。
[0019] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物基因或其蛋白的抑制剂包括基因 的反义核酸、microRNA、或抗体。
[0020] 在另一优选例中，所述的主要组织相容性复合物基因或其蛋白的抑制剂为主要组 织相容性复合物基因的SiRNA或shRNA。
[002。 在另一优选例中，所述的siRNA序列如SEQ ID NO. :4-5所示（小鼠）。
[0022] 在另一优选例中，所述的SiRNA序列如沈Q ID NO. :9-10、12-13、15-16所示（人）。
[0023] 在另一优选例中，所述的药物组合物包括作为活性成分的主要组织相容性复合物 基因或其蛋白的抑制剂，和药学上可接受的载体。
[0024] 在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型包括：
[00巧]片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、注射液、粉 针剂。
[0026] 在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型还包括喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、挥发 性液体、外用溶液剂、洗剂、德淋剂、搔剂、己布膏剂、膏药、橡胶膏剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、 滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂或栓剂。
[0027] 在另一优选例中，所述的剂型为注射剂，较佳地，为静脉注射剂、腹腔注射剂。
[0028] 本发明第二方面，提供了一种治疗组织和/或器官移植性免疫排斥；和/或降低 组织和/或器官移植供体主要组织相容性复合物表达量的药物组合物，所述的药物组合物 包括作为活性成分的主要组织相容性复合物基因或其蛋白的抑制剂，和药学上可接受的载 体；较佳地，所述的药物组合物为对离体的待移植组织和/或器官进行预处理从而降低待 移植组织和/或器官免疫原性的的预处理液。
[0029] 在另一优选例中，所述的抑制剂为主要组织相容性复合物的siRNA。
[0030] 在另一优选例中，所述的药物组合物还包括非特异性免疫抑制剂。
[0031] 在另一优选例中，所述的非特异性免疫抑制剂包括环抱素、雷帕霉素、他克莫司、 霉酪酸醋、咪哇立宾、环磯醜胺。
[0032] 本发明第H方面，提供了一种体外降低待移植组织和/或器官免疫原性的方法， 包括步骤，采用含有主要组织相容性复合物基因或其蛋白抑制剂的预处理液对离体的待移 植组织和/或器官进行预处理，从而降低离体的待移植组织和/或器官的免疫原性。
[0033] 本发明第四方面，提供了一种降低移植供体-受体非匹配组织相容性抗原的方 法，包括步骤：
[0034] (a)对移植供体和受体的组织相容性抗原的匹配程度进行检测；
[0035] 化）筛选出在（a)中所检测获得的高表达的非匹配组织相容性抗原；
[0036] (C)针对化）中所获得的高表达的组织相容性抗原，制备特异性抑制所述高表达 的组织相容性抗原的抑制剂；
[0037] (d)将（C)中所述的抑巧惊U施用于供体和/或受体。
[0038] 在另一优选例中，所述的抑制剂为非匹配组织相容性抗原编码序列的siRNA。
[0039] 在另一优选例中，所述的施用包括在移植前施用于供体和/或受体，和/或在移植 后施用于受体。
[0040] 在另一优选例中，所述的移植前包括术前1周维持，较佳地，为术前48小时维持。
[0041] 在另一优选例中，所述的移植后包括术后1周维持，较佳地，为术后48小时维持。
[0042] 在另一优选例中，所述的施用为注射施用。
[0043] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可W互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0044] 图1显示了血清、肝脏、T细胞、肺组织中anti-M肥-I -SiRNA的表达水平。从 图1可W看出，anti-MHC- I -SiRNA的表达