有用的。
[0240] 对于其他呼吸道疾病，如慢性梗阻性肺病（COPD)、哮喘、呼吸道感染（例如，肺炎、 肺炎肺囊虫、囊肿性纤维化和呼吸道合胞病毒）的预防和/或治疗以及对于浆液性中耳炎 (胶耳）的治疗也是有用的。
[0241] 以下实施例更详细地说明了本发明。 实施例
[0242] 实施例1-重建表面活性剂的制备
[0243] MM
[0244] 购买磷脂1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱（DPPC)、1-棕榈酰-2-油 酰-sn-甘油-3-磷酸甘油（POPG)、源自具有高于99%蛋黄纯度（下文称为纯蛋黄-PC)和 约40% (下文称为非纯蛋黄-PC)的蛋黄的L-α-磷脂酰胆碱。按照Curstedt T. Analysis of molecular species of ether analogues of phosphatidylcholines from biological samples(来自生物样品的磷脂酰胆碱的醚类似物的分子物质的分析）.Biochim Biophys Acta 1977 ;489:79-88中记载的，通过Lipidex-5000上的色谱分离了源自兔肝的磷脂酰胆 碱级分（下文称为肝-PC)。
[0245] 按照 WO 2008/044109 中公开的制备了多肽 SP-C33 (Leu)和 ox-mini-B(Leu)，而按 照TO 2009/018908中公开的制备了多肽oxmini-B27。
[0246] 重律表而活件剂的制各
[0247] 将溶解于氯仿/甲醇98:2 (v/v)中的磷脂与DPPC: POPG:蛋黄-PC (肝-PC) 50:10 :40重量的比例混合。
[0248] 通过加入2%重量含量的每种多肽来制备相应的重建表面活性剂制备物（表面活 性剂A和B)。将获得的表面活性剂在氮下蒸发并且以80mg/ml的浓度重悬浮于0. 9% w/w NaCl水溶液中。
[0249] 实施例 2-使用由 2 % ox mini_B(Leu)+2 % SP_C33(Leu)+50 % DPPC+10 % P0PG+40%肝-PL制得的重组表面活性剂的体内实验
[0250] 在出生时用200mg/kg的重建表面活性剂制备物（80mg/ml)治疗未成熟的新生兔 子（胎龄27天）。接受相同剂量的poractant a (Curosurf?)的动物作为阳性对照，而未 治疗的同窝出生者作为阴性对照。用最大充气压力的标准化顺序平行地给新生兔子通气。 为了打开肺，首先将压力设定在35cmH 20，持续lmin。这种募集调动后，将压力降至25cmH20， 持续15min，接着进一步维持在20和15cmH 20。最后，将压力再次升至25cmH20,持续5分钟， 此后，用氮将肺再通气5min，然后切除，用于气体体积测量。进行了实验，没用PEEP。作为 中值给出了潮气量和肺气体体积。
[0251] 通过浸没在4%中性福尔马林中来固定肺，脱水并包埋在石蜡中。用苏木精和曙红 将横向切片染色。用计算辅助图像分析仪测量了肺泡体积密度，使用总实质作为参照体积。
[0252] 结果表明包含基于肝-PL和DPPC和POPG作为合成磷脂的磷脂混合物，各自2%的 SP-C33Leu和ox mini-B(Leu)的重建表面活性剂获得了与Curosurf?相似的潮气量（图1) 和肺气体体积（图2)。此外，从表3,可以认识到所述重建表面活性剂产生了与Curosurf? 相似的肺泡体积密度并且显著高于只有磷脂的混合物。
[0253] 表3 :早产兔子中的肺泡体积密度（％ )
[0254]
【主权项】
1. 一种重建表面活性剂，其包含： 磷脂混合物； 天然表面活性剂蛋白SP-B的多肽类似物；和 由通式：IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLQpGpL p (I)表示的天然表面活性剂蛋白 SP-C的多肽类似物， 其中： D是选自M或硫原子上氧化的M、I、L和nL (异亮氨酸）的氨基酸； P是〇或1 所述磷脂混合物由以下组成： i) 含量为50%重量的DPPC; ii) 含量为10%重量的POPG ;和 iii) 含量为40%重量的不饱和磷脂的天然衍生级分，其基本上由以下组成： 30 % 至 50 % P0PC，10 % 至 20 % PLPC，4 至 10 % P (: I) 0PC，5 至 8 % SLPC，5 至 8 % D0PC， 1 至 3% SAPC，5 至 15% S0PC，1 至 2% PAPC，1 至 3% PDPC，0 至 3. 5% S0PE，0 至 8% SAPE， 0 至 4% SLPE，0 至 2. 5% PLPE，0 至 3. 5% POPE ;0 至 2. 0% LAPE，0 至 2. % LLPE，0 至 10% PSM ； i)、ii)和iii)的全部含量基于磷脂混合物的总重来计算。
2. 根据权利要求1的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-C的多肽类似物由 通式 IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL(Ic)表示的序列组成。
3. 根据权利要求1或2的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-B的多肽类似 物由通式（II)来表示 (FP 0 PLPY) fC A LCRALIKRIQA Q IPKGGR Q LPQLVCR LVL? CS (II) 其中： 0是选自L、I和C，优选C的氨基酸残基；和 A是选自W、I和L，优选W的氨基酸残基； D是独立地选自M、I、L和nL，优选L的氨基酸残基； ?是选自R和T，优选R的氨基酸残基；和 f是具有值0或1的整数。
4. 根据权利要求3的重建表面活性剂，其中f?是0的通式（II)的多肽类似物选自由以 下通式表示的序列： CWLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIa) CLLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIb) CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IIc) CLLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IId)。
5. 根据权利要求3的重建表面活性剂，其中f?是1的通式（II)的多肽类似物选自由以 下通式表示的序列： FPCPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (lie) FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIf) FPCPLPYCWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IIg) FPIPLPYCWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IIh)
6.根据权利要求I或2的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-B的多肽类似 物由通式（III)来表示 XALQ RALIKRFNRYLTPQLV Q RLVLRO 2 q (III) 其中 X是选自C、A和G，优选C的氨基酸残基； A是选自W、L、nL和I，优选W或L的氨基酸残基； ?是选自C、A和G，优选C的氨基酸残基； 2是选自S、G和A的氨基酸残基；和 q是〇或1。
7. 根据权利要求6的重建表面活性剂，其中多肽选自由以下通式表示的序列： CLLCRALIKRFNRYLTPQLVCRLVLRC (IIIa) CWLCRALIKRFNRYLTPQLVCRLVLRC (IIIb) ALLCRALIKRFNRYLTPQLVCRLVLRAA (IIIc) GLLCRALIKRFNRYLTPQLVCRLVLRGG (IIId)
8. 根据之前任一项权利要求的重建表面活性剂，其中不饱和磷脂的天然衍生级分是源 自蛋黄的L-a-磷脂酰胆碱。
9. 一种药物制剂，其包含根据权利要求1至8任一项的重建表面活性剂，所述制剂是溶 液、分散液、悬浮液或干粉的形式，任选结合一种或多种药物学上可接受的载体。
10. 根据权利要求9的药物组合物，其中所述制剂是水性悬浮液的形式。
11. 根据权利要求10的药物制剂，其中重建表面活性剂的浓度为水性悬浮液的5至 100mg/ml〇
12. -种试剂盒，其包含： a) 第一单位剂型的粉末形式的根据权利要求1至8任一项的重建表面活性剂； b) 第二单位剂型的药物学上可接受的载体；和 c) 用于包含所述第一和第二剂型的容器装置。
13. 根据权利要求1至8任一项的重建表面活性剂，用作药物。
14. 根据权利要求1至8任一项的重建表面活性剂，用于治疗或预防早产儿的呼吸窘迫 综合征（RDS)或用于治疗或预防表面活性剂缺乏或机能障碍相关的其他疾病。
15. 根据权利要求14的重建表面活性剂，其中疾病包括成人RDS(ARDS)、胎便吸入综合 征（MAS)和支气管肺发育异常（BH))。
【专利摘要】本发明涉及一种重建表面活性剂，其包含磷脂混合物，以及天然表面活性剂蛋白SP-C的特定类似物与天然表面活性剂蛋白SP-B的类似物的组合物。本发明还涉及药物组合物及其试剂盒，并且涉及其用于治疗或预防RDS和其他呼吸道疾病的用途。
【IPC分类】C07K14-475, C07K14-435
【公开号】CN104812771
【申请号】CN201380060505
【发明人】J·约翰森, T·库斯泰德特
【申请人】奇斯药制品公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2013年11月20日
【公告号】CA2891933A1, EP2922868A1, US9074018, US20140142021, WO2014079898A1