[0033] 图4是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)的GPC图谱。
[0034] 图5是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)的单糖组成测定图谱，其中a是单糖标品气相 图，b是FHP-1水解衍生化后的气相图。
[0035] 图6是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)刚果红实验图。
[0036] 图7是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)红外图谱。
[0037] 图8测定的是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)对IfepG2. 2. 15细胞的抗病毒活性 的影响，阳性对照拉米夫定的浓度为20 y g/mL，其中a是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)对 IfepG2. 2. 15细胞存活率的影响图；b、c、d分别是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)对HbeAg、 HBsAg以及DNA的影响图。
[0038] 图9测定的是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)对RAW264. 7细胞的免疫活性的影响，阳 性对照脂多糖的浓度为50 y g/mL，其中a是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)对RAW264. 7细胞存 活率的影响；b、c、d、e分别是亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)对IL-12、TNF- a、IL-6、N0诱生 的影响图。
【具体实施方式】
[0039] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0040] 实施例1 :制备亚麻籽硫酸酯多糖
[0041] 按照以下步骤制备亚麻籽硫酸酯多糖：
[0042] (1)亚麻籽壳仁分离：亚麻籽经粉碎机粉碎后，过筛，将过筛后的亚麻籽粉与甘油 和乙醇充分混和，离心20min，分别收集上层亚麻籽仁和沉积在底层的亚麻籽壳；
[0043] (2)亚麻籽多糖的提取：取250g步骤（1)获得的亚麻籽壳为原料，料液比1:20 (g/ mL)、浸提温度60 °C、浸提时间40min、输出功率600W、搅拌速度600r/min条件下进行微波辅 助热水浸提多糖，提取液过100目筛，收集浓缩液，真空冷冻干燥；
[0044] (3)亚麻籽多糖的分离：将步骤（2)冷冻干燥后的粗提物用Sevage法脱蛋白25 次，3500r/min离心20min，取上清液；向上清液中加入3倍体积的无水乙醇，4°C下醇沉4h， 3500r/min离心20min，取沉淀，真空冷冻干燥后得到亚麻籽壳粗多糖约8. 35g ;
[0045] (4)亚麻籽多糖的纯化：将步骤（3)获得的亚麻籽壳粗多糖配成5mg/mL溶液，上 样于DEAE-Sepharose Fast Flow柱（洗脱曲线如图3所不），依次用0~2. Omol/L NaCl 溶液阶梯式洗脱，分管收集，并用苯酚硫酸法检测多糖，合并糖反应阳性收集液，50°C旋转 蒸发浓缩，透析48h (3000~5000Da)后真空冷冻干燥；将干燥后的多糖配成2mg/mL溶液， 上样于Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱，用蒸馏水洗脱，收集多糖组分，再次透析后经截留分 子量为1 X 106Da的膜超滤，分别收集截留液，浓缩、冷冻干燥得分子量大于1 X 106Da的样品 亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)。
[0046] 实施例2 :制备亚麻籽硫酸酯多糖
[0047] 按照以下步骤制备亚麻籽硫酸酯多糖：
[0048] (1)亚麻籽壳仁分离：亚麻籽经粉碎机粉碎后，过筛，将过筛后的亚麻籽粉与甘油 和乙醇充分混和，离心30min，分别收集上层亚麻籽仁和沉积在底层的亚麻籽壳；
[0049] (2)亚麻籽多糖的提取：取250g步骤⑴获得的亚麻籽壳为原料，料液比1:30 (g/ mL)、浸提温度100°C、浸提时间60min、输出功率800W、搅拌速度900r/min条件下进行微波 辅助热水浸提多糖，提取液过100目筛，收集浓缩液，真空冷冻干燥；
[0050] (3)亚麻籽多糖的分离：将步骤（2)冷冻干燥后的粗提物用Sevage法脱蛋白30 次，5000r/min离心30min，取上清液；向上清液中加入5倍体积的无水乙醇，4°C下醇沉 12h，5000r/min离心30min，取沉淀，真空冷冻干燥后得到亚麻籽壳粗多糖约11. 55g ;
[0051] (4)亚麻籽多糖的纯化：将步骤（3)获得的亚麻籽壳粗多糖配成10mg/mL溶液，上 样于DEAE-Sepharose Fast Flow柱（洗脱曲线如图3所不），依次用0~2. 0mol/L NaCl 溶液阶梯式洗脱，分管收集，并用苯酚硫酸法检测多糖，合并糖反应阳性收集液，60°C旋转 蒸发浓缩，透析48h (3000~5000Da)后真空冷冻干燥；将干燥后的多糖配成5mg/mL溶液， 上样于Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱，用蒸馏水洗脱，收集多糖组分，再次透析后经截留分 子量为1 X 106Da的膜超滤，分别收集截留液，浓缩、冷冻干燥得分子量大于1 X 106Da的样品 亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)。
[0052] 实施例3 :亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)纯度鉴定
[0053] 采用GPC对实施例2分离纯化得到的亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)进行纯度测定。 具体测试条件和方法如下：采用TSK G-5000PWXL和TSK G-3000PWXL色谱柱串联2414型示 差折光检测器，柱温为35°C，流动相为0. 02mol/L的KH2P04,流速为0. 6mL/min。准确称取样 品2. 0~2. 5mg，溶于lmL流动相中，过0. 22 y m滤膜，手动进样10 y L，GPC图谱如图4所 示。根据色谱图判定该多糖组分的纯度，结果显示纯化后的FHP-1为均一分子量多糖，分子 量大约为2626kD。
[0054] 实施例4 :亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)的单糖组成测定
[0055] 取10mg实施例2制备的亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)样品，添加4. OmL的2mol/L 三氟乙酸100~120°C水解6~8h后成为单糖，再加入吡啶0. 5mL，于90°C反应0. 5h，冷却 后再加〇. 5mL乙酸酐于90°C反应0. 5h，冷却后加水和氯仿萃取3次，取氯仿层蒸干，残渣 用氯仿溶解，〇. 22 y m真空过滤器过滤，进行GC分析。气相色谱条件：HP-5石英毛细管柱 (30mX0. 32mmX0. 25ym);载气为N2;进样量：1 yL ;流速是lmL/min ;不分流，进样口温度： 250°C ;FID检测器的温度设置为250°C ;程序升温：初始温度100°C，保持0. 5min，以3°C / min升至160°C，改变升温速度，继续升温。以10 °C /min的速度升到250°C，并保持5min。 FHP-1单糖组成测定结果如图5所示，结合单糖标准品气相谱图，显示FHP-1主要由鼠李糖、 阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、岩藻糖七种单糖组成。
[0056] 实施例5 :亚麻籽壳扫描电镜图及刚果红实验分析
[0057] 随机选取浸提前后的亚麻籽壳1~2mg，置于铜台上，利用扫描电镜对比微波辅助 提取前后亚麻籽壳表面变化，如图2所示，对比微波辅助提取前（a)与提取后（b)，亚麻籽壳 由表面光滑的胶质薄膜明显变得凸凹不平，可能是由于微波透过萃取介质到达物料内部， 导致细胞内压超过细胞壁所能承受的压力，造成细胞破裂，使得内部活性成分游离出来。
[0058] 取一定量实施例2制备的FHP-1多糖配成2mL 1~2mg/mL的溶液，加入2mL的 刚果红试剂（100 y mol/L)，逐渐加入NaOH溶液（lmol/L)，使得碱的终浓度从Omol/L慢慢 地上升到0. 5mol/L，记录全波长扫描并做空白对照，结果如图6所示，FHP-1与刚果红形成 络合物的最大吸收波长同空白对照刚果红相比发生红移，表明FHP-1能与刚果红形成络合 物，有规则的三螺旋构象，而具有三螺旋构象的有序结构是其具有免疫活性的重要因素。
[0059] 实施例6 :元素分析、硫酸钡比浊法测定硫酸基含量及红外图谱分析
[0060] 取3~5mg左右的实施例2制备的FHP-1多糖，置于锡杯中，进行元素分析，结果 见表1，其中硫元素含量达0. 85%，比同类多糖含量都要高。硫酸钡比浊法中硫酸基含量标 准曲线为y = 0. 259x-0. 014, R2= 0. 990,线性关系良好，经计算FHP-1中的硫酸基含量为 2. 63%〇
[0061] 表1 FHP-1元素分析结果
[0062]
[0063] 取3~5mg实施例2制备的FHP-1多糖与溴化钾混合研磨压片，室温条件下在 4000~400cm 1范围内进行红外光谱扫描，扫描结果如图7所示，其中1244cm 1是S = 0伸 缩振动，820~850cm 1是C-0-S振动特征频率，823. 71cm 1表示硫酸基位于单糖残基的平伏 位置，结合前面的元素分析以及硫酸钡比浊法测定结果证明亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-1)中 存在少量的硫酸酯结构，硫酸酯多糖具有广泛的生物学性质，包括抗病毒、抗肿瘤、对免疫 系统作用和抗凝活性。
[0064] 实施例7 :亚麻籽硫酸酯多糖（FHP-