茯苓多糖活性组分和成分、其制备方法及用图_2

文档序号:9822215阅读:来源:国知局
; (4. 0 ~7. 0),例如为 1. 0 ; (1. 5 ~1. 7) ; (0. 1 ~0. 2) ; (5. 5 ~ 6.巧。
[0039] 在本发明的实施方案中,所述多糖成分II中岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩 尔比为 1. 0 ;1. 63 ;0. 16 ;6. 29。
[0040] 根据本发明第二方面任一项的巧冬多糖成分,所述多糖成分I和/或多糖成分II 中含糖量为90% W上,例如为95% W上,例如为98%,例如为99%,例如为100%。
[0041] 在本发明的实施方案中,所述多糖成分I和/或多糖成分II为分子量均一的杂多 糖,分子量成正态分布。
[0042] 根据本发明第二方面任一项的巧冬多糖成分,其中多糖成分I的峰高分子量约 为27900Da,分子量范围为1. 0 X 1〇4~5. 5 X 1〇4〇日,例如1. 0 X 1〇4~5. 0 X 1〇4〇日,再例 如2. 0X 104~4. 0X 104Da和/或多糖成分II的峰高分子量约为29000Da,分子量范围为 1. 0 X 1〇4 ~6. 0 X 1〇4〇日,例如 1. 0 X 1〇4 ~5. 0 X 1〇4〇日,再例如 2. 0 X 1〇4 ~4. 5 X 1〇4〇日。
[0043] 在本发明的一个具体实施方案中,所述多糖成分I为PCP- I。
[0044] 在本发明的一个具体实施方案中,所述多糖成分II为PCP- II。
[0045] 本发明第Η方面涉及巧冬总多糖,其是通过如下方法获得的:
[0046] (1)取中药材巧冬,加入水浸泡,得到水提液;
[0047] 似将步骤(1)得到的水提液减压浓缩,浓缩液进行己醇沉淀,沉淀部分加入水溶 解,取上清液进行水透析或膜过滤;
[0048] (3)取透析液或滤液进行浓缩和冷冻干燥得到巧冬总多糖。
[0049] 根据本发明第Η方面任一项所述的巧冬总多糖,其特征在于如下的(1)-(11)项 中的任意一项或多项:
[0050] (1)步骤(1)中所述中药材巧冬为巧冬片、巧冬块或巧冬菌丝体粉末;
[0051] (2)步骤(1)中所用水为蒸傭水或去离子水;
[005引 做步骤(1)中,加入水浸提的温度为4~100。优选为20~6(TC ;
[005引 (4)步骤(1)中,将水提后得到的巧冬残渣按照相同条件进行一次或多次水提,合 并水提液,例如进行两次浸提;
[0054] 妨步骤(1)中水的用量为巧冬药材的5-30倍量化/Kg),例如为10-20倍量化/ Kg);
[0055] (6)步骤(2)中,将得到的水提液在50-55°C下进行减压浓缩,得到浓缩的水提 液;
[0056] (7)步骤似中,己醇沉淀的条件是:醇沉后己醇的终浓度为60-80 %,例如 70-75% ;醇沉的时间大于12小时,例如为48-72小时;
[0057] (8)步骤(2)中,己醇沉淀后离必,得到的沉淀用水进行一次或多次溶解,离必,合 并上清液;
[0058] (9)步骤(2)中,透析所用透析袋的截留分子量大于1000 ;或超滤去除分子量小于 1000的小分子成分;
[005引 (10)步骤似中,用自来水和/或蒸傭水进行透析;
[0060] (11)步骤(3)中所述浓缩为在50-55°C下进行减压浓缩。
[0061] 本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项所述的巧冬多糖组分的制备方法,其 包括如下步骤:
[0062] 取本发明第Η方面任一项所述的巧冬总多糖,溶解后进行DEAE-纤维素柱层析, 依次用&0和0. 15-0. 3mol/L胞肥〇3(例如0. 25mol/LNaHC〇3)洗脱,检测糖峰(例如苯 酪-硫酸法),分别得到多糖组分A和多糖组分B。
[0063] 在本发明的一个实施方案中,利用DEAE-纤维素柱分离所述巧冬总多糖中的中性 多糖组分。
[0064] 在本发明的一个实施方案中,所述DEAE-纤维素柱为DEAE-纤维素(肥03 )柱。
[0065] 在本发明的一个实施方案中,层析分离时洗脱液的流速为,流速为Iml/min,每管 收集10ml。
[0066] 本发明第五方面涉及本发明第二方面任一项的巧冬多糖成分的制备方法,其包括 如下步骤:
[0067] 取本发明第一方面任一项所述的巧冬多糖组分A,经凝胶柱层析,用水或0. 05~ 0. 2mol/L化C1 (例如0.1mol/L化C1)洗脱,苯酪-硫酸法检测糖峰,分离纯化,则获得多 糖成分I。巧冬多糖组分B,经凝胶柱层析,用水或0. 05~0. 2mol/L化C1 (例如0.1mol/L 化Cl)洗脱,检测糖峰(例如苯酪-硫酸法),分离纯化,则获得多糖成分II。
[0068] 在本发明的实施方案中,其中所述凝胶柱包括葡聚糖凝胶柱(例如Se地adex柱)、 聚丙帰醜胺凝胶柱(例如Bio-Gel P柱)或琼脂糖凝胶柱(例如Se地arose柱和Bio-gel A柱)或丙帰葡聚糖凝胶(例如Se地ac巧1 S柱)。
[0069] 在本发明的实施方案中,所述葡聚糖凝胶的得水值为5-20(例如为10)。
[0070] 在本发明的实施方案中,其中所述葡聚糖凝胶柱包括Se地adexG-100或Se地adex G-75。
[0071] 在本发明的实施方案中,层析分离时洗脱液的流速为0. 2-0. 4ml/min,例如为 0. 3ml/min,每管收集 3ml。
[0072] 本发明第六方面涉及巧冬多糖组分,其选自多糖组分A和多糖组分B中的一种或 两种,其中,所述多糖组分A和多糖组分B是通过如下方法获得的:
[0073] 取本发明第Η方面任一项所述的巧冬总多糖,溶解后进行DEAE-纤维素柱层析, 依次用&0和0. 15-0. 3mol/L胞肥〇3 (例如0. 25mol/L胞肥〇3)洗脱,检测糖峰,分别得到 多糖组分A和多糖组分B。
[0074] 在本发明的实施方案中,利用DEAE-纤维素柱分离所述巧冬总多糖中的中性多糖 组分。
[00巧]在本发明的实施方案中,所述DEAE-纤维素柱为DEAE-纤维素(肥03 )柱。
[0076] 在本发明的实施方案中,层析分离时洗脱液的流速为1.0ml/min,每管收集10ml。
[0077] 根据本发明第六方面任一项的巧冬多糖组分,其中,
[007引所述多糖组分A含糖的重量百分比为50-80%,例如为50-70%,例如为50-60%, 例如为55-60%,其含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其中岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半 乳糖的相对摩尔比为1. 0 ; (1. 0~3. 0) : (0. 1~1. 5) : (3. 0~9. 0);
[0079] 所述多糖组分B含糖的重量百分比为50-80%,例如为例如为55-70%,55-65%, 例如为57-62%,其含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其中岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半 乳糖的相对摩尔比为1. 0 ; (1. 0~3. 0) : (0. 1~5. 5) : (3. 0~10. 0)。
[0080] 根据本发明第六方面任一项的巧冬多糖组分,其中多糖组分A含糖的重量百分比 为 56-59%。
[0081] 根据本发明第六方面任一项的巧冬多糖组分,其中多糖组分B含糖的重量百分比 为 59-61%。
[0082] 根据本发明第六方面任一项的巧冬多糖组分,其中多糖组分A中岩藻糖、甘露糖、 葡萄糖和半乳糖的相对摩尔比为1. 0 ; (1. 5~2. 5) : (0. 2~0. 8) : (4. 0~8. 0),例如为 1. 0 : (1. 6 ~1. 8) ; (0. 4 ~0. 6) ; (4. 5 ~6. 5)。
[0083] 在本发明的实施方案中,所述多糖组分A中岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的相 对摩尔比为 1. 0 ;1. 68:0. 50:5. 22。
[0084] 根据本发明第六方面任一项的巧冬多糖组分,其中多糖组分B中岩藻糖、甘露糖、 葡萄糖和半乳糖的相对摩尔比为1. 0 ; (1. 3~2. 5) : (3. 5~5. 0) : (4. 0~9. 0),例如为 1. 0 ; (2. 1 ~2. 3) ; (4. 3 ~4. 7) ; (7. 0 ~7. 5)。
[0085] 在本发明的实施方案中,所述多糖组分B中岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩 尔比为 1. 0 ;2. 20:4. 48:7. 20。
[0086] 根据本发明第六方面任一项的巧冬多糖组分,其中多糖组分A的峰高分子量约为 28210Da,其分子量范围为1.0Xl〇4~6. 0Χ10403,例如1.0Xl〇4~5. 0Χ10403,再例如 2. 0 X 104~4. 5 X 104Da,和/或多糖组分Β的峰1的峰高分子量约为28582Da,其分子量范 围为 1. OXl〇4 ~6. 0Χ10403,例如 1. OXl〇4 ~5. 0Χ10403,再例如 2. OXl〇4 ~5. 0Χ10403, 峰2的峰高分子量644500Da,其分子量范围为2. ΟΧ1〇5~10. 0Χ10503,例如4. ΟΧ1〇5~ 8. 0X10?Da〇
[0087] 在本发明的一个具体实施方案中,所述多糖组分A为PCP-A。
[0088] 在本发明的一个具体实施方案中,所述多糖组分B为PCP-B。
[0089] 本发明第走方面涉及巧冬多糖成分,其选自多糖成分I和多糖成分II中的一种或 两种,其中,所述多糖成分I和多糖成分II是通过如下方法获得的:
[0090] 取本发明第一方面或第六方面任一项所述的巧冬多糖组分中的多糖组分A或B, 分别经凝胶柱层析,用水或0. 05~0. 2mol/L化C1 (例如0.1mol/L化C1)洗脱,检测糖峰 (例如苯酪-硫酸法),分离纯化,则分别获得多糖成分I或多糖成分II。
[0091] 在本发明第走方面任一项的巧冬多糖成分,其中所述凝胶柱包括葡聚糖凝胶 柱(例如Se地adex柱)、聚丙帰醜胺凝胶柱(例如Bio-GelP柱)、琼脂糖凝胶柱(例如 Se地arose柱和Bio-gel A柱)或丙帰葡聚糖凝胶柱(例如Se地ac巧1 S柱)。
[0092] 在本发明的实施方案中,所述葡聚糖凝胶的得水值为5-20(例如为10)。
[0093] 在本发明的实施方案中,其中所述葡聚糖凝胶柱包括Se地adexG-100、Se地adex G-75。
[0094] 在本发明的实施方案中,层析分离时洗脱液的流速为0. 2-0. 4ml/min,例如为 0. 3ml/min,每管收集 3ml。
[0095] 根据本发明第走方面任一项的巧冬多糖成分,其中,
[0096] 所述多糖成分I含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其中岩藻糖、甘露糖、葡萄 糖和半乳糖的摩尔比为1. 0 ; (1. 0~2. 5) : (0. 1~1. 0) : (3. 0~9. 0);
[0097] 所述多糖成分II含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其中岩藻糖、甘露糖、葡萄 糖和半乳糖的相对摩尔比为1. 0 ; (0. 5~3. 0) ; (0. 05~1. 0) : (3. 0~10. 0)。
[0098] 根据本发明第走方面任一项的巧冬多糖成分,其中多糖成分I中岩藻糖、甘露糖、 葡萄糖和半乳糖的相对摩尔比为1. 0 ; (1. 0~2. 5) : (0. 1~1. 0) : (3. 0~9. 0),例如为 1. 0 ; (1. 2 ~2. 0) ; (0. 1 ~0. 5) ; (5. 0 ~8. 0),例如为 1. 0 ; (1. 7 ~1. 9) ; (0. 2 ~0. 3): (7. 0 ~7. W。
[0099] 在本发明的实施方案中,所述多糖成分I中岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的相 对摩尔比为 1. 0 ;1. 81 ;0. 27 ;7. 27。
[0100] 根据本发明第走方面任一项的巧冬多糖成分,其中多糖成分II中岩藻糖、甘露糖、 葡萄糖和半乳糖的摩尔比为1. 0 ; (1. 0~3. 0) ; (0. 05~0. 8) : (3. 0~9. 0),例如为1. 0 : (1. 3 ~1. 9) : 1 ~0. 4) : (4. 0 ~7. 0),例如为 1. 0 ; (1. 5 ~1. 7) : 1 ~0. 2) : (5.
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