CATTACCGCCATTTTCCAAGATGTGAGACTTTTGATAAAACTGACAGTGAAACGGAAACATTCTTATT CGGACATGTAACGTCAACACACCTAAATGAAACCCAGACAGATGGCGCCACATGTACATCTGGAGTTGGCGATATCA ATTCAGCCCTGTTAGAGAAGATTAAAAACTTGGATTTGTCAACAAACACCAAATGTCCCAGACATAAATACTATGCC CAATACAAAGATCGACTACGAACATTTGACAGTCCAAAATGGCCTGCAAATCACCCAATGAAGAAAGAAACCTTAGC TAAAGCTGGTCTTTTCTATGCAGGCGTAGGAGACCTGTGCGAGTGCTACTGCTGTGGAGGACAACTGGAAGAATTCG AGGAAGGTGATGTCCCTGTCGAGGAGCACGACAAATACTTCAGTGATATTTGCGTTCTTGCTATCAACAGAAAATTG CAAGGAGAAAGCTGA，；
[0031] 8)将步骤5)、6)和7)获得的序列利用现有的重叠片段法进行连接，利用EMBL的 INTERPRO程序预测序列结构域并进行家族归类，利用NCBI的BLAST程序进行序列结构域和 功能注释，发现序列含有凋亡抑制蛋白的BIR特征结构域，可归类为BIR超家族，且基因注 释为IAP，因此可确定获得栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因编码区全长序列（见附图la-d)。
[0032] 实施例2
[0033] 栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因 2编码全序列的获得。
[0034] 1)从 NCBI (http://www. ncbi. nlm. nih. gov/)中获得柿孔扇贝表达序列，计 1，222, 461 条。
[0035] 2)去除掉小于lOObp和包含不确定碱基' Ν'的序列后，将剩余的1，058, 961条序 列；利用CAP3对这些序列进行拼接组装，命令为' CAP3 ZK_RAW. fasta-o 50-p 95'，共获得 contig 序列 79, 617 条，singlet 序列 571，539 条，即总共获得 UniGene 序列 651，156 条。
[0036] 3)将步骤2)获得的UniGene序列通过运行BLAST工具包中的F0RMATDB命令，获 得栉孔扇贝UniGene局部比对数据库，具体运行参数为'FORMATDB-i UniGene-p F'。
[0037] 4)利用现有牡蛎已公布48条凋亡抑制蛋白序列，借助BLAST工具包中的BLASTALL 命令和上述获得的UniGene局部比对数据库进行比对，具体命令参数为' BLASTALL-i oys ter48.fasta_d UniGene-p tBLASTn-e le5-〇 ZK.IAP. fragment'。而后将获得序列中的 E 值低于le w，且对牡蛎凋亡抑制蛋白基因编码序列覆盖率大于50%的序列初步确定为栉孔 扇贝凋亡抑制蛋白基因编码片段。
[0038] 5)根据上述确定的栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因编码片段设计扩增引物YF1和 YF2,其中 YF1 序列为 ' GCAGGTTTCTTCTATTGTGA'，YF2 序列为 ' TCTGTCTGTAAGTCTGACCC' ；扩 增后测序获得序列 'GCAGGTTTCTTCTATTGTGAAAACGGAGACACTGTAGTCTGTTATTATTGTGGGTTAGCA TTGAACGCGTGGGAAAGAGGAGATCGACCATGGACAGAACATGCACGGTGGTCTCCCAATTGTACACATATTCTGAA TATGATTGGACCTAATTTTATTAAGGAAACACTTGAATGCGACGGCGATGTGAAAAAGATGCAGGCTGTTGACGACA AATACCAAAGGATAAGACATGGGTCAGACTTACAGACAGA'，利用 EMBL 的 INTERPR0 程序预测序列结构 域并进行家族归类，利用NCBI的BLAST程序进行序列结构域和功能注释，发现序列含有凋 亡抑制蛋白的BIR特征结构域，并可归类为BIR超家族，因此可确定获得栉孔扇贝凋亡抑制 蛋白基因编码片段。
[0039] 6)根据上述获得的栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因编码区序列设计5'端扩 增引物 K5R1 和 K5R2,其中 K5R1 序列为 ' CCACACGGTAAAAACACAATGGATA'，K5R2 序列 为' TGCACATTCACCACAACAACTTAAT'，以栉孔扇贝cDNA序列为模板，进行巢式PCR扩增，扩增 体系和条件为，cDNA模板50ng，引物分别为5pmol，Taq酶1U，95°C加热lOmin后，进行30 个热循环，其中每个循环包括95°C加热30s，6(TC加热40s，72°C加热30s，最后72°C加热 lOmin。第一轮扩增产物稀释10倍后，以上述相同条件进行第二轮扩增。获得栉孔扇贝凋 亡抑制蛋白基因编码区 5' 端序列 'ATGAATGACAGAAGAGTAAGTATTCCGGATCTTGAAATTGATCATGC ACCTGCAGATCAGCGTAGAGAAGGATTTGATGAACCTGCAACAGCTTATCATCAAAGAAATGGATTTAACAATGGGA ATGTATCACCAAGAACAAATAATTGTCCTCCTACAGTAGTGAATGCATCTCATGTGTTGAATCATGCACCACAAAGG GAAGTTGTAAATGATACCGGTGTTTCATTTGATCGGCCAAAATACATTCAGTATGCTATCCGTGTGTCAAGACTCAA AACATTAAAAAATTGGCCGGAATCACATTTTCTTAAGTCCAGTGAACTATCAGATGCAGGTTTCTTCTATTGTGAAA ACGGAGACACTGCAGTCTGTTATTATTGTGGGTTAGCATTGAACGCGTGGGAAAGAGGAGATCGACCATGGACAGAA CATGCACGGTGGTCTCCCAATTGTACACATAT' ；
[0040] 7)根据获得的栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因编码区序列设计3'端扩增 引物 K3F1 和 K3F2，其中 K3F1 序列为 'AGTCTGTTATTATTGTGGGTTAGCA'，K3F2 序列 为' GGTGGTCTCCCAATTGTACACATAT'以栉孔扇贝cDNA序列为模板，进行巢式PCR扩增，扩增 体系和条件为，cDNA模板50ng，引物分别为5pmol，Taq酶1U，95°C加热lOmin后，进行30 个热循环，其中每个循环包括95°C加热30s，6(TC加热40s，72°C加热30s，最后72°C加热 lOmin。第一轮扩增产物稀释10倍后，以上述相同条件进行第二轮扩增。获得栉孔扇贝凋 亡抑制蛋白基因编码区 3' 端序列 'AGTCTGTTATTATTGTGGGTTAGCATTGAACGCGTGGGAAAGAGGAG ATCGACCATGGACAGAACATGCACGGTGGTCTCCCAATTGTACACATATTCTGAATATGATTGGACCTAATTTCATT AAGGAAACACTTGAATGTGACGGCGATGTGAAAAAGATGCAGGCTGTTGACGACAAATACCAAAGGATAAGACATGG GTCAGACTCACAGACAGATTCTGTTAAGGGTGCCACAGCCAAGAAGGAGCCGGAATTCTTTGAAGACATTATGCAGA GATCATCTGTCCGGAGTGTAGTAGAAATGAACATTGATGAGACAAAAGTTCGAGATGCCATCCGTATTCTTATCCAT AGAAAAAAAAGTGATGAGTTCAAAGCAGTAGATTTAATGGAGGTAGTGTTTGATATAGACGATGGAAACTTAACAAA AGAGGACAAATGTGCCTCGGAAGGAAAAGTTACGAAAAAAGAAACGAACAGGCCAAGTTCAGGTGAAAACTCCTTTA AGTCAGATATTGTGAAGGAGAATGACAGTCTGAGAGACCAACTTACCTGCAAGGTGTGCCTAGAAGCTCCCGTATCC ATTGTGTTTTTACCGTGTGGTCATTTAAGTTGTTGTGGTGAATGTGCACCTGCATTAAAAAACTGTCCAATTTGTCG GGCAAACATCAAGGGAAGTGTGAGAACATTTCTCACATAA ,；
[0041] 8)将步骤5)、6)和7)获得的序列利用现有的重叠片段法进行连接，利用EMBL的 INTERPR0程序预测序列结构域并进行家族归类，利用NCBI的BLAST程序进行序列结构域和 功能注释，发现序列含有凋亡抑制蛋白的BIR特征结构域，可归类为BIR超家族，且基因注 释为IAP，因此可确定获得栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因编码区全长序列（见附图2a-d)。
[0042] 实施例3
[0043] 栉孔扇贝凋亡抑制蛋白基因3编码全序列的获得。
[0044] 1)从 NCBI (http://www. ncbi. nlm. nih. gov/)中获得柿孔扇贝表达序列，计 1，222, 461 条。
[0045] 2)去除掉小于100bp和包含不确定碱基' Ν'的序列后，将剩余的1，058, 961条序 列；利用CAP3对这些序列进行拼接组装，命令为' CAP3ZK_RAW. fasta-o 50-ρ 95'，共获得 contig 序列 79, 617