适用于水产品中46种药物的筛查方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，涉及一种适用于水产品中46种药物的筛查方法，即， 适用于水产品中46种药物残留的液相色谱-串联四级杆/飞行时间质谱筛查方法。
【背景技术】
[0002] 水产品中药物使用情况较普遍，且存在过量滥用、违规使用等现象。滥用和违规使 用药物不仅会造成环境的恶化污染，更会通过食物链的富集作用转移到人体中，对人体健 康产生危害。水产用药涉及种类繁多，因此建立一个普适的通用筛查方法十分有必要。
[0003]目前常用的药物残留检测方法有酶联免疫法、气相色谱串联质谱法、液相色谱法 和液相色谱串联质谱法等。其中基于多反应监测模式的液相色谱/三重四级杆串联质谱联 用技术（LC-MS/MS)具有灵敏度高、准确度高、重现性好等特点，在药物残留检测中的应用 最为普遍。但LC-MS/MS方法大都只能针对某一类目标化合物，面对多组分药物残留需要建 立多个检测方法，造成样品反复测定，费时费力。目前，基于四极杆/飞行时间质谱（Q-T0F/ MS)的高分辨率质谱技术为多组分目标化合物的分析提供了新的研究方向。Q-T0F/MS技术 具有高特异性、高质量准确度、高质量分辨率等优点，理论上能够在一次检测过程中分析数 百种化合物。该技术通过建立不同种类化合物数据库匹配检索，可以方便、快速地对不同种 类的药物进行筛查与鉴定。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种采用液相色谱-串联四级杆/飞行时间质谱 方法快速、准确地定性定量测定水产品中46种药物的检测方法。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供一种适用于水产品中46种药物的筛查方法 (适用于水产品中46种药物的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法高通量快速筛查方 法），46种药物（目标药物）为磺胺胍、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、恶喹 酸、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异唑、磺胺甲二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲基异嘧啶、磺胺对 甲氧基嘧啶、磺胺间甲氧基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲基 哒嗪、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、 氟罗沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥比沙星、双氟沙星、青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西 林、萘夫西林、头孢氨苄、头孢匹林、头孢唑林、头孢洛宁、头孢匹罗、头孢喹肟、红霉素、甲基 睾丸酮、丙酸睾酮、群勃龙和诺龙；依次进行以下步骤：
[0006] (A)样品提取：待测水产品经过提取液提取后静置，并用去离子水稀释（10倍~20 倍）后过玻璃纤维滤膜（孔径1. 5μm)，得稀释液；
[0007] (B)固相小柱萃取：利用固相萃取小柱对生物样品中所含的药物（46种药物）进 行富集，固相萃取小柱为OasisHLB小柱，使用前先用甲醇（6mL)活化，超纯水（6mL)淋洗， 再将稀释液（50~100mL)通过活化好的HLB柱；富集过程中流速保持为4~6mL/min(较 佳5mL/min)，整个过程保持小柱湿润；
[0008] (C)溶剂洗脱：利用有机试剂将目标药物（S卩，上述46种目标药物）从固相萃取 柱上洗脱下来；
[0009] (D)浓缩与定容：对洗脱液进行浓缩，溶剂替换、定容，过膜（0· 22μm有机滤膜） 后保存；
[0010] (E)上机筛查：通过液相色谱-串联四级杆/飞行时间质谱对样品进行筛查和鉴 定，液相色谱-串联四级杆/飞行时间质谱条件为：
[0011] 高效液相色谱仪：HPLC-Agilentl290 ;
[0012] 色谱柱：AgilentPlusC18 柱，尺寸为 3.OnmX100nm，1. 8μm;
[0013] 柱温：4(TC;
[0014] 流速：0· 25mL/min；
[0015] 梯度洗脱流动相：
[0016] A:加入甲酸的5mmol乙酸铵水溶液，甲酸的体积浓度为0. 1% ;
[0017] B:加入甲酸的甲醇，甲酸的体积浓度为0. 1 % ;
[0018] 流动相梯度：
[0019]
[0020] 质谱仪：AgilentQ-T0F6540 ;
[0021] 离子源：DualAgilentJetStreamElectrosprayIonization(DualAJSESI) 源；
[0022] 电离模式：正离子模式；
[0023] MS扫描范围：100-1000m/z;
[0024] MS/MS碰撞电压固定3个强度通道（碰撞电压分别10eV，20eV，40eV);
[0025] 进样量：2yL;
[0026] 采用全扫描模式，调用已建立的质谱一级筛查谱库（如表1所述）以分子式匹配 模式自动检索，质量允许误差设置5ppm;
[0027] (F)确证：对筛查发现的可疑化合物采用二级质谱信息库进一步确证；
[0028] 具体为：
[0029] 通过一级筛查谱库对样品进行46种化合物筛查匹配，一级筛查谱库具体要素包 括化合物精确质量数，化合物质谱同位素峰丰度信息以及化合物的色谱保留时间，每个要 素权重相同，并以此筛查匹配得分；对匹配得分超过70分的筛查结果确认其为疑似化合 物，采用targetms/ms模式对其进行二级质谱信息采集，与建立的二级质谱信息库（如表 1所述）进行匹配确证，如有两个二级特征碎片离子能够匹配成功的，即为确证；
[0030] 备注说明：二级质谱信息就是该化合物母离子所对应的二级特征质谱碎片离子信 息（即子离子），至少要求两个子离子碎片信息；
[0031] 一级筛查时，匹配得分< 70分，即确定不含有此化合物，因此，无需上述确证；
[0032] (G)定量：对于经过确证的化合物，采用空白样品基质溶液配制标准曲线，外标法 定量。
[0033] 作为本发明的适用于水产品中46种药物的筛查方法的改进：所述步骤（A)中的提 取液是由乙腈和水按体积比3:2配置而成。
[0034] 作为本发明的适用于水产品中46种药物的筛查方法的进一步改进：所述步骤（C) 中的有机溶剂是体积比为1:1的乙腈和甲醇的混合溶剂。洗脱1次即可。
[0035] 作为本发明的适用于水产品中46种药物的筛查方法的进一步改进：所述步骤（D) 中对洗脱液进行浓缩是用队缓缓吹扫溶剂至近干；所述溶剂替换是用乙腈进行复溶；所述 的定容是用体积浓度1%甲酸水溶液定容。
[0036] 本发明与现有技术相比具有以下显著效果：
[0037] 采用液相色谱-串联四级杆/飞行时间质谱高分辨率、高精确质量数的特点，所 得定性结果比液相色谱-串联三重四级杆质谱更准确可靠，并且采用定性同时进行定量测 定。
[0038] 本发明前处理简单，操作易行，并且可以利用该仪器的目标化合物扫描模式来对 化合物进行一级质谱全扫之后的二级质谱扫描，从而增强该方法的灵敏度和可信度，数据 分析与处理的结果呈现简单明了，定性评价综合全面，可以实现传统仪器较难达到的全面 筛选多组分药物这一功能。
[0039] 综上所述，本发明采用基于液相色谱-飞行时间质谱技术建立的水产品中磺胺 胍、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、恶喹酸、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异唑、磺胺 甲二挫、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲基异嘧啶、磺胺对甲氧基嘧啶、磺胺间甲氧基嘧啶、磺胺 氯哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲基哒嗪、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、 培氟沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥比 沙星、双氟沙星、青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、萘夫西林、头孢氨苄、头孢匹林、 头孢唑林、头孢洛宁、头孢匹罗、头孢喹肟、红霉素、甲基睾丸酮、丙酸睾酮、群勃龙和诺龙的 高通量快速筛查方法，并可对实际样品进行定性确证与定量。
【附图说明】
[0040] 下面结合附图对本发明的【具体实施方式】作进一步详细说明。
[0041] 图1是实施例1中的46种药物的提取离子流图；
[0042] 图 1 中：Cpd59:Di