溶液混合后，在60°C水浴机械揽拌下，加入上述处 理过的包膜树脂，保持2小时后冷却，过滤树脂并用纯化水洗涂至溶液接近中性，渐干树脂 后60°C烘干2小时，冷却后即为理论交联度为25%的DNA免疫吸附剂。
[0129] 实施例62 :相比于实施例57,本实施例将实施例57中所用的大孔吸附树脂改为 0. 71mm至0. 85mm的山西理鸿产炭化树脂，其它步骤与实施例57相同，制备成理论交联度为 30%的DNA免疫吸附剂。
[0130] 实施例63 :相比于实施例57,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例57相同，制备成理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0131] 实施例64 :本实施例的PVA的浓度为1% (w/v)，理论交联度为30%，DNA免疫吸附 剂的制备过程如下。
[0132] 取实施例57中配制的PVA溶液250ml，用注射用水稀释到500ml，按照步骤2配制 3mg/ml的DNA溶液，将配制好的PVA溶液和DNA溶液W体积比1 :1.2混合均匀后，即为包膜 液。将880ml按实施例1中方法制备的0.6-0. 71mm大孔吸附树脂，倒入上述包膜液中，揽 拌5分钟后过滤，渐干后于化无水乙醇中充分分散树脂，过滤并吹干表面后于烘箱中50°C 烘2小时后取出，冷却，即为包膜树脂。按照理论交联度30%，计算，配制含马来酸酢17mmol 的溶液1L，加入17ml浓度为0. 5mol/L的硫酸溶液混合后，在60°C水浴机械揽拌下，加入上 述处理过的包膜树脂，保持2小时后冷却，过滤树脂并用纯化水洗涂至溶液接近中性，渐干 树脂后60°C烘干2小时，冷却后即为理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0133] 实施例65 :相比于实施例64,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例64相同，制备成交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0134] 实施例66:相比于实施例64,本实施例将实施例64中所用的大孔吸附树脂改为上 海汇合达产的活性炭，粒径为0. 8mm至1mm，其它步骤与实施例64相同，制备成PVA的理论 交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0135] 实施例67 :相比于实施例66,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例66相同，制备成理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0136] 实施例68 :相比于实施例64,本实施例将实施例64中所用的大孔吸附树脂改为 0. 71mm至0. 85mm的山西理鸿产炭化树脂，其它步骤与实施例64相同，制备成理论交联度为 30%的DNA免疫吸附剂。
[0137] 实施例69 :相比于实施例68,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例68相同，制备成理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0138] 实施例70:本实施例的PVA的浓度为0. 2% (w/v)，理论交联度为30%的吸附剂的 制备过程如下。
[0139]取实施例57中配制的PVA溶液50ml，用注射用水稀释到500ml，按照步骤2配制 3mg/ml的DNA溶液，将配制好的PVA溶液和DNA溶液W体积比1 :1. 2混合均匀后，即为包 膜液。将880ml按实施例1中方法制备的0. 6mm至0. 85mm大孔吸附树脂，倒入上述包膜液 中，揽拌5分钟后过滤，渐干后于化无水乙醇中充分分散树脂，过滤并吹干表面后于烘箱中 50°C烘2小时后取出，冷却，即为包膜树脂。按照理论交联度30%，计算，配制含马来酸酢 3. 5mmol的溶液1L，加入3. 5ml浓度为0. 5mol/L的硫酸溶液混合后，在60°C水浴机械揽拌 下，加入上述处理过的包膜树脂，保持2小时后冷却，过滤树脂并用纯化水洗涂至溶液接近 中性，渐干树脂后60°C烘干2小时，冷却后即为理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0140] 实施例71:相比于实施例70,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例70相同，制备成理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0141] 实施例72 :相比于实施例70,本实施例将实施例70中所用的大孔吸附树脂改为上 海汇合达产的活性炭，粒径为0. 8mm至1mm，其它步骤与实施例70相同，制备成PVA的理论 交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0142] 实施例73 :相比于实施例72,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例72相同，制备成理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0143] 实施例74 :相比于实施例70,本实施例将实施例70中所用的大孔吸附树脂改为 0. 71mm至0. 85mm的山西理鸿产炭化树脂，其它步骤与实施例70相同，制备成理论交联度为 30%的DNA免疫吸附剂。
[0144] 实施例75 :相比于实施例74,本实施例将马来酸酢改为戊二醒水溶液，其它步骤 与实施例74相同，制备成理论交联度为30%的DNA免疫吸附剂。
[0145] 根据上面本发明的具体实施例制备的含交联PVA膜的DNA免疫吸附剂，与采用火 棉胶包膜的DNA免疫吸附剂进行SLE吸附抗双链DNA抗体吸附性能的比较。
[0146] 分别取制备的DNA免疫吸附剂2ml，各加入SLE病人血浆20ml，在37°C振荡下吸附 两小时，取吸附前后血浆检测。采用酶联免疫吸附法对抗双链DNA抗体进行定量检测，试剂 盒为上海科新生产，仪器为深圳爱康全自动酶免仪化anusAE120。
[0147] 对照样的制备过程如下。对照样采用0. 71至0. 85mm的山西理鸿产炭化树脂作为 吸附剂载体，根据专利CN100348268C中的DNA免疫吸附剂的制备方法，制备出的本专利对 照样的DNA免疫吸附剂。
[0148] 所用DNA免疫吸附剂样品及对照样如下表1所示：
表1 性能检测结果如下表2所示：
表2 根据表2的数据，从静态的吸附性能结果来看，发现含交联PVA膜的DM免疫吸附剂对SLE病人血浆中的抗双链DNA抗体的吸附性能，在总体上要优于采用火棉胶包膜制备成的 DM免疫吸附剂。
【主权项】
1. DNA免疫吸附剂，所述DNA免疫吸附剂包括吸附剂载体，所述吸附剂载体上负载有 DNA，其特征在于： 所述DNA免疫吸附剂还包括交联聚乙烯醇膜，所述交联聚乙烯醇膜对所述吸附剂载体 形成包膜作用。2. 根据权利要求1所述的DNA免疫吸附剂，其特征在于： 所述交联聚乙烯醇膜的理论交联度为10%至30%。3. 根据权利要求1所述的DNA免疫吸附剂，其特征在于： 所述交联聚乙烯醇膜是采用戊二醛、马来酸酐、乙二酸、丙二酸、丁二酸、己二酸或这四 种酸相应的酸酐作为交联剂制备的； 所述吸附剂载体为大孔吸附树脂或活性炭或炭化树脂，所述吸附剂载体的粒径范围在 0. 1毫米到1. 18毫米之间。 4. DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 首先执行步骤A或步骤B; 步骤A:使聚乙烯醇水溶液中的聚乙烯醇发生交联反应，形成交联聚乙烯醇溶液，在所 述交联聚乙烯醇溶液中加入DNA溶液，形成包膜液，加入吸附剂载体，用所述包膜液对所述 吸附剂载体进行包膜； 步骤B:在聚乙烯醇水溶液中加入DNA溶液后与吸附剂载体混合，再加入交联剂和催 化剂，聚乙烯醇发生交联反应形成交联聚乙烯醇膜，所述交联聚乙烯醇膜及DNA对所述吸 附剂载体形成包膜作用； 然后执行步骤C，过滤后用水洗涤至无溶剂残留，溶液的pH接近中性； 最后，干燥得到成品。5. 根据权利要求4所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：当聚乙烯醇的理 论交联度小于15%时，则选择执行所述步骤A; 在执行所述步骤C的过程中，用滤袋过滤后加入乙醇分散所述吸附剂载体并沥干。6. 根据权利要求4所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：当聚乙烯醇的理 论交联度多15%时，则选择执行所述步骤B。7. 根据权利要求4至6任一项所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于： 所述聚乙稀醇水溶液的浓度范围是2%。至2% (w/v)。8. 根据权利要求5所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于： 加入的所述DNA溶液与所述交联聚乙烯醇溶液的体积比为0. 8 :1至1. 2 :1。9. 根据权利要求6所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于： 所述聚乙烯醇水溶液与所述DNA溶液的体积比为1 :0. 8至1 :1. 2。10. 根据权利要求4至6任一项所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于： 采用戊二醛、马来酸酐、乙二酸、丙二酸、丁二酸、己二酸或这四种酸相应的酸酐作为交 联剂； 采用大孔吸附树脂或活性炭或炭化树脂作为所述吸附剂载体，控制所述吸附剂载体的 粒径范围在0. 1毫米到1. 18毫米之间； 聚乙烯醇的种类为PVA-1792、PVA-1788、PVA-2099、PVA-2088 或PVA-1588 ;聚乙烯醇水 溶液的配制过程为：把聚乙烯醇加入到处于搅拌状态的水中，分散均匀后升温至80°C，搅 拌2小时后得到溶解充分、混合均匀的聚乙烯醇水溶液； DNA溶液的配制过程为：首先把纯度85%以上的小牛胸腺DNA溶解于0. 2mol/L的pH=7. 4的Tris-HCL缓冲溶液中，得到浓度为2 mg/ml至6mg/ml的DNA原溶液；然后在DNA 原液中依次加入等体积的氯化四氮唑兰饱和溶液和等体积的无水乙醇，搅拌或振荡至完全 溶解，得到DNA溶液； 在所述过滤和水洗涤的步骤中，用2倍至5倍吸附剂载体体积的无水乙醇分散所述 吸附剂载体，所述pH被水洗涤至中性，在所述干燥过程中，首先风干至具有流动性，然后在 50 °C至60 °C下烘干2小时并冷却； 所述聚乙烯醇发生交联反应的理论交联度的计算公式为：理论交联度=(nCLA*Z/nPVA)X100%，其中，nCLA表示交联剂的物质的量，Z表示交联剂与聚乙烯醇上OH基体的结 合数，nPVA表示聚乙稀醇单体的物质的量； 所述催化剂为硫酸溶液，所述硫酸溶液的浓度为〇. 5mol/L，所述硫酸溶液的加入体积 为所述交联剂物质的量的〇. 1倍至〇. 5倍。
【专利摘要】本发明涉及一种DNA免疫吸附剂及其制备方法。DNA免疫吸附剂包括吸附剂载体，吸附剂载体上负载有DNA，DNA免疫吸附剂还包括交联聚乙烯醇膜,交联聚乙烯醇膜与DNA混合形成对吸附剂的包膜作用。本发明提供的DNA免疫吸附剂的制备方法包括以下步骤：首先执行步骤A或步骤B;步骤A为先交联再包膜，而步骤B为先包膜再交联。本发明提供的DNA免疫吸附剂对SLE病人血浆中的抗双链DNA抗体的吸附性能，在总体上要优于采用火棉胶包膜制备成的DNA免疫吸附剂。
【IPC分类】B01J20/30, B01J20/26, B01J20/28, A61M1/36
【公开号】CN105289538
【申请号】CN201510753243
【发明人】董凡, 黄杰辉, 杜鸿雁
【申请人】珠海健帆生物科技股份有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月4日